兔出血症病毒分鉴定vp60基因克隆及rt-pcr检测方法的建立.pdf

四川农业大学硕士论文 中文摘要 兔出血症(Rabbit hemorrhagic 的兔的急性高度接触性传染病，给养兔业造成巨大的经济损失，为了在生产中防制该 病，有必要对毒株进行分离鉴定及其特性研究，以及建立一种灵敏、准确的检测方法． 本研究从兔病料中分离鉴定出了3株有不同血凝性的兔出血症病毒，分别命名为 为1：5，l：10，但琼扩实验及对流免疫电泳均能看到清晰的沉淀线，电镜负染可见大 量球形，核心密度不同、大小约30hm的病毒粒子． 是一个很保守片段．在遗传进化上，世界各地的RHDV毒株在核苷酸水平上趋向4个支 谱系，在氨基酸水平上趋向3个支谱系，谱系问没有明显的地理或时I闻特征， 别组成两支不同的谱系，以上结果对认识R皿y的变异趋势具有参考价值。利用软件分 析了分离毒株的分子量，疏水性、抗原性、表面可能性、密码子偏爱性和二级结构等 分子结构特征，并推测可能与其血凝性最相关的氨基酸位点为P2区的第304、305位， 及E区的第432位；其次是F区的第480、508位．该分析结论在国内外未见系统报道， 为RHDV的分子生物学增添了新的资料． 根据GenBank中的衣壳蛋白VP60基因内的保守序列，用Primer5．0设计出l对 i差tYT检测；该方法特异性强，重 并采用该RT-PCR方法对人工致死家兔体内的RHDV 的灵敏度高、特异性好的RT-PCR方法及其P,HDV抗原检测结果在国内未见报道· 本研究分离鉴定出有不同血凝性兔出症病毒株，并对其衣壳蛋白VP60基因进行了 分子生物学及其结构特征增添了新的资料，并为生产中RHDV的检测提供了科学依据和 一种灵敏、准确的检测方法． 关键词：兔出血症病毒；衣壳蛋白；VP60基因；序列分析；RT-PCR检测 Ⅱ 四川农业大学硕士论文 and VP60 Identificationthe of Protein Thelsohfionand CloningCapsid RT-PCR GeneofRHDVstrainsand DetectionforRHDV Tian Veterinary Lag(PreventiveMedicine) Directed byPro￡WangHong-ning Abstract：．Rabbit iscausedRabbit hemorrhagicdisease(IbD),whichby hemorrhagic disease a and disease．andcall∞saloHnou$ Virus(R]田)V)．israt蛔∞me，白taIcontagious in controlthe isolateand loss to economyrabbit自皿她To di鬻as岛itsn∞觑略ary id_a俯匆 the their asensitive virus蛐觚andstudy andaccuratedetec血喀md枷forRHDV． Inthis strainsofRHDVwereisolatedandidentifie