三黄鸡cd4胞区基因的克隆表达及其多抗的制备.pdf

摘要 CD4分子是一类主要存在于T细胞表面的单链跨膜糖蛋白，它在淋巴细胞分化和参与细胞免 疫方面起重要作用． 本研究根据已经发表的莱航鸡CD4分子基因序列，设计合成一对引物，通过PCR的方法从 获得的目的片段与表达载体pMAL-p2X连接而构建重组表达质粒．构建的重组表达质粒转化到大 肠杆菌TBI中，筛选含重组质粒的基因工程菌．重组工程菌经IPTG诱导得到高效表达，其细 用间接ELISA法测定抗血清的效价． 结果表明，本研究成功地克隆了三黄鸡CD4胞外区基因，其大小为1206bp。所构建的表达 TBI中成功表达了分子量约为87．5KDa的融合蛋白，与预测的 质粒pMAL-p2X／chCD4在E．cog 大小一致．表达产物经Amylose树脂亲和层析柱分离纯化，得到了高纯度的鸡CD4胞外区的融 合蛋白。 8．192X106的鼠源抗三黄鸡CD4胞外区的抗 利用此蛋白免疫小鼠，制备了ELISA效价达h 体，证明该蛋白具有良好的抗原性，为进一步研究鸡CD4分子的结构和功能及其之间的关系奠定 了基础。 关键词：鸡CD4)胞外区；克隆；原核表达；ELISA Abstract is centralrolein CD4a chain仃ansmembrane cell皇,whicha single glycoprotemmairdy佣T play and differentiationcell-mediated lymphocyte immunity． A of WU tOthe chickenCD4 the pairprimerdesigneda∞)rdmspublished genesequences,and oflhechicken w笛donedfromcDNA it．The CD4 fragment a血a∞lluI盯托gion librarybyusing gene then clonedinto wasconfnmed DNA was fiagment successfully pGEM-T-Easyvector,which by andres城ct identification．ThentheDNA andthe sequenceanalysis enzyme fragment plasmid tOconstructtherecombinant therecombinant pMAL-p2Xwe∞ligated expressionplasmid，and bacteriawe∞identified andrestrict engineering bysequenceanalysis enzyme the bacteriaWClq，inducedto foreign was recombinant目嚼删：ering express protein,whichpurified with resincolunm．Purifiedrecombinant MBP-chCD4，wasby amyloseaffinity