根癌农杆菌介导EAFY基因转化苹果的研究.pdfVIP

绱 要 苹果是世界上主要的果树树种之一，但荩进入结果期较晚，影响了早期经济效髓 的获得，而通过生物技术将促进开花的基因导入苹果基因组内，促进其提早开花结果 楚一条十分重要豹途簌，将获褥‘一劳永逡’静效果。本试骏以M26苹果砧本缝臻懿 为试孝考，对影稳苹采融本茎段再生帮擐簇农籽菠夯导苹采遗转转讫静霆素送行了系绫 研究，初步建立了M26苹果砧木茎段的荐缴体系，优化了校瘸农杆菌介导M26苹浆砧 术的遗传转化体系，并以在拟南芥克隆的穰分生组织特异性基阑三翱痧(L硒基因为目 的熬因，利用农杆菌介导法转化嘎拉、富士、M26，并通过GUS报告基因检测到外源 整合该基因豹嘎拉荦巢、誊士莩票、M赫赫耪痰，为遗簧转憩掇供了分子生物学滚攥。 本试验主要研究如下： 1．通过分析激素、暗培养、茎段部位、放置方式、继代时间等因素对M26茎段褥 生的影响，确立了M26蕊段高效再生体系：选取继代培养2¨25d的幼嫩茎段的上、 2。不围菝生素对甏黧投条生鬏骞一定瓣耱裁终爨，专那霉豢5疆g毽挣露《其雯袋， 生根的最佳抗生素浓殿。 搭熬Gus藩毪率，麓辩瞧保证’}较寒乡}穰棼再生率。共培养麓鬃逛2砖d送行薅逡窍 利予提高根癌农秆菌的转化的再生率和外襁体的Gus的鬻饿率。本试验优纯的根瘸 筑逡，经过7．8次豹继代薅选，获褥拣毪芬、抗性莛，并送行扩繁、生摄。 4．不同静遗传转识体系其转纯效率蠢缀大的不弱。与盱片嚣_生髂系籀跑，以蒸毅 为外植体进行转化，转化茎段经Gus组织化学染色检测，其GuS的瞬时表达攀为 13：33％，表达强度较弱，仅在切口和基部脊少量表达；且获得抗性芽较难，抗性劳率 仪为O．2％，经Gus检测、PcR检测均呈假阳性。 5。通过优化根癌农杼蓥介导苹果遗传转化体系，以￡n7基因为鑫的基因进彳亍转化 曦羧、富圭、蜘筠豹磷突，对获缛豹撬囊努遽行了Gus缓绥像攀聚色、PcR硷溺， 滋寓井源基因已经整合到转纯抗往芽的鏊戮缀中，获褥了转掰V基因的嘎挝苹祭、 富士苹果、M26新种餍。 美键词：苹果；遗传转化：工正■乃7：根癌农杆菌介导 Tl拍s孙r稍秘娃曲 Agm飙w跆，妇m强班宅秘商院球静media妊：d with．LB4FyGene of缅eApple Aulhor：“u Jing Major：Pomology Sh躺Ji鞠穗lu Advi∞f：№j{—z酶珏g∞d Abstract wasoneofthemost f椭it int11eword．nhada Apple popularspecies longjuvenile 曲疑se抽atdelaycdi堪re印dlldivedevelopmenli珏early of aocck撵|e 矗p爹l嚣wi氇凌e沁yg赫黼糙gul基ing鬟0we矗赫g∞畦di|s重董㈣fiBg瘛毪oan耋b蠢羲g to this of anicle，the 辨a￡bene蠡tp∞duction．In e掇dencyrcgcneration 6吣nl stemsandtransfomlationwerestudied．Thee蚯cient of stems