抗霜霉病相关基的鉴定.pdf

摘要 摘要 黄瓜霜霉病是保护地栽培黄瓜的主要病害，黄瓜抗霜霉病基囡的研究是目前抗病育种领 域的一项热点工作。本研究以抗霜霉病黄瓜品种东农129作为试验材料，利用DDRT-PCR技 术研究黄瓜叶片经霜霉病病原菌侵染后基冈表达的差异。其目的在于寻找与黄瓜霜霉病抗性 相关的基因。辅助黄瓜抗病育种I：作。并对所获得的差异表达基囡进行了时空表达分析，进 一步验证了所获基因的表达特异性。 。 主要研究结果包括： (1)反向Northern鉴定将31个差异表达基因的的假阳性片段剔除后，获得3个阳性差异 表达基因，其经连接转化后发现50号差异表达基因片段存在电泳共迁移现象，其中 存在2个基因片段，因此共克隆出4条与黄瓜霜霉病抗性相关的阳性差异表达基因， 因高度同源，相似性达100％，得分197，其他3个基闻为未知新基因。 (2)对所得4个基冈进行特异性表达分析，其中49-2基因在霜霉病病原菌诱导黄瓜植株 6h后在叶片中大量表达，直至植株人颦受损的侵染后期仍有一定量的表达，表达过 程可能伴随整个霜霉病侵染期：50-5基因在霜霉病诱导24h后植株叶片中大量表达， 48h后表达量有所减弱，寅至植株人颦受损的侵染后期仍有一定鼙的表达；50-7基因 仅在植株经霜霉病诱导后24h的叶片中特异表达；52-14基冈只在霜霉病诱导后24h。 48h的植株叶片中特异表达。49-2基冈可在其在黄瓜幼嫩果实和衰老果实中表达。50-5 基因可在黄瓜幼嫩果实中表达。 (3)4个基因均存在于抗霜霉病品种东农129的基因组中，在易感病品种L18的基因组中 不存在，说明本研究获得的基因为抗霜霉病黄瓜品种中特有的，经霜霉菌诱导后特异 表达的基困，可用于黄瓜抗霜霉病晶种的分子筛选。 (4)构建了黄瓜mRNA差异显示技术的反应体系，该体系在实际工作中操作简便，重复 性好，cDNA模板的使用罱较以往文献报道减少了一倍，节约了：T=作成本。 关键词：黄瓜； 霜霉病：DDRT-PCR：抗病相关基因{ ofCucumberResistant Identification Downy Mildew GeneDDRT-PCRMethod Mutuality by Abstract Cucumbermildewisamaindiseaseoncucumber planting， downy dependency research ahotworkin oncucumberresistant mildewhasbecometo downy gene resistantdisease field．ThisresearchUSe I 29whichresist breeding DungNong mildewas DDRT-PCRmethod cucumberdowny experimentationmaterial，use researchthe after wereinvaded cucumberleafdifferential expressedgene they by mildew bac