桦褐孔菌菌株亲关系及人工驯化栽培研究.pdf

摘 要 桦褐孔菌觑D讲谢D脚向甜纠Fr．)Pil敏是十分珍稀而又名贵的药用真菌，以菌 核入药。在分类学上隶属于担子菌亚门(BaSidiomycotina)、层菌纲 桦褐孔菌的菌丝体极其耐寒，主要分布在北半球北纬45。～50。的地区。国外对桦 褐孔菌的药理作用及其化学成分的研究比较深入，而国内的研究则刚刚起步，且 局限于形态学研究。桦褐孔菌的分子学、人工栽培研究几乎空白。目前桦褐孔菌 的野生资源日益枯竭，人工驯化栽培迫在眉睫。为此，我们于2004-2006年利用 从不同地域采集的桦褐孔菌野生菌核分离得到的纯菌丝为试材，通过拮抗试验、 同工酶、RAPD分子标记对桦褐孔菌菌株的亲缘关系进行了研究，并对桦褐孔菌 进行了人工驯化栽培研究。主要研究结果如下： ． 1、对桦褐孔菌菌株菌丝间的拮抗性进行了比较研究，结果表明：桦褐孔菌各 菌株间差异属于地理分布差异，其中，菌株cx01与cx02亲缘关系最近，其次 是见03与JL01，JL02。 2、采用不同的提取剂，在同一条件下对桦褐孔菌菌丝体过氧化物酶同工酶进 行提取，并通过聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，对桦褐孔菌菌丝体的过氧化物酶同工 酶谱带进行比较研究，结果表明：采用Tris．HCl 0H6．9)做为提取剂制备的样品 液经电泳后，在图谱中条带丰富，带型清晰，提取效果最好：Tris-甘氨酸QH8．3) 提取效果最差。 3、采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，对采自6个不同地区的桦褐孔菌菌核分 离得到的菌株纯菌丝过氧化物酶同工酶进行研究。结果表明：所有菌株酶带数目 在2～8条之间，在R卢O．75、尉卸．98处为桦褐孔菌菌株的特征酶带。F11z巧聚 类法数量分析表明，菌株阎隶属度在【O．250，1．000】之阀。当隶属度为O．250时分 析菌株的亲缘关系。结果显示，朝鲜的菌株与吉林的菌株亲缘关系较近与黑龙江 的菌株亲缘关系较远，菌株间的遗传差异属于地理分布(纬度)差异，部分菌株间 存在较近的亲缘关系。 4、用CTAB改良法对桦褐孔菌菌丝体基因组DNA进彳子了提取，并以其为 模板对影响RAPD扩增的重要参数进行优化试验。结果表明，PCR扩增体系最 佳反应条件是：在25“l体积中，模板DNA浓度为40叫pl，10碱基引物浓度为 40℃退火1min，72℃延伸1．5min，45个循环，72℃后延伸5min。 5、采用RAPD技术对来自不同地区的桦褐孔菌菌株亲缘关系进行研究，获 得了桦褐孔菌不同菌株的DNA指纹图谱。结果显示：12个引物共扩增出167条 带，其中10l条为多态性带，多态性比率为60．5％，同一培养时期的各菌株问 RAPD图谱存在一定的地理分布差异，部分菌株间存在较近的亲缘关系。若以遗 传距离O．508为结合线，可将供试菌株划分为三大类，朝鲜的菌株CX0l、CX02(纬 为一类。朝鲜的菌株与吉林的菌株亲缘关系较近与黑龙江的菌株亲缘关系较远， 菌株分类结果与各菌株的地理分布(纬度)差异一致，可以确定各菌株间属于种内 及地理分布差异，部分菌株间存在较近的亲缘关系。 6、以桦褐孔菌野生菌核采用组织分离法获得纯菌种，并迸行了桦褐孔菌各 级菌种的制作及人工驯化栽培研究。结果表明：桦褐孔菌母种培养基以葡萄糖 209、黄豆粉109、KH2P04I 培养基以玉米粒为最好；菌核人工栽培培养料以桦木屑52％、玉米芯26％、麦 麸20％、自糖l％、石膏l％、水分65％为最好，生物学效率达30．8％：桦褐孔 菌菌核发生适宜温度范围在22～28℃、栽培袋不开口、无光、栽培袋含水量为 60％有和于菌核的形成。 关键词：桦褐孔菌，菌株，亲缘关系，菌核，人工驯化 Ⅱ Abstract a ValIlableandrareo衔cinal haS Very 加D门Df淞D6脚“埘is epiph”e．sclerotium It to tlle ofmedicine． BaSidiomycotina， propenies