根癌农杆菌介导抗寒基因转录因子CBF转化苹果的研究.pdf

摘要 domestica 本研究以苹果(Malus EHAl05介导的遗传转化效率的若干因素的研究，优化了苹果再生／fi定芽系统和遗传 转化系统，并成功将cBF基因导入到了苹果的基因组中。 主要研究结果如下： 1．苹果不同外植体再生不定芽能力不同，以白化茎段的再生效果优丁叶片。适宜 苹果白化茎段不定芽再生的体系为：继代苗暗培养20天左右获得白化攀段，取1～2 会有芽点出现。M26和Gala的不定芽再生效率均达到95％以卜。 2．培养基中添加适宜浓度的BA(5．om∥L)和TDz(1．om∥L)可使M26白化 茎段不定芽再生达到较高的水平，但TDz的使用会增加再生芽的玻璃化现象，以 5．011吲L的BA用于M26白化茎段不定芽再生较为适宜。 Vc呵以抑制 3．白化茎段的褐化现象比叶片严重，在再生培养基中添加lOOm∥L 茎段伤口处褐化现象加重。 4．继代苗苗龄对白化茎段不定芽的再生有很大影响：取自继代培养20～25天的白 化茎段上取材的1～2节位的茎段，再生频率最高。低于此苗龄白化茎因抽生太短不利 于取材，而高于此苗龄，茎段分化率明显降低，并EL褐化现象加重。 5．在根癌农杆菌EHAl05介导的遗传转化中，当以白化茎段和叶片为转化材料时， 共培养培养基中添加30“mol／L的AS可以提高苹果的基因转化效率。 7．通过对影响农杆菌介导转化的各种因素进行筛选，得到了一条最佳的转化途 径：外植体在分化培养基上预培养1天；农杆菌活化至对数生长期，菌液浓度为 oD600=O．6左右；侵染外植体10min；共培养2天；然后脱菌、选择同时进行。 8．共有12个转化株系通过了卡那霉素抗性检测，具体包括三个方面：①转化株 在附加卡那霉素50m∥L的继代培养基上能够连续增殖继代，②转化株叶片在附加卡 那霉素30m∥L的分化培养基上的再生能力同在无卡那霉素的培养基上的再生能力无 明显差异，③转化株在附加卡那霉素30m∥L的生根培养基中能正常生根。 9，通过卡那霉素抗性筛选的植株经PcR结果表明：在检测的植株中有一株扩增 出的特异条带和阳性对照一致，阴性对照未能扩增出任何条带。表明CBF基因已整 合到这棵植株的基因组DNA中。 10．转化株经4℃低温胁迫处理后，植株体内游离脯氨酸的积累在低温胁迫18h 后骤然增加，增加幅度明显高于未转化株。 关键词：苹果；转录因子cBF基因；再生；根癌农杆菌遗传转化：PcR；脯氨酸 Sttldies CBF on飘anse“pt王。珏翻c协r in m肼咖c扫胛sApple川撑胁嚣如册础掰Borkh) M毒能 Polnology 翩lhor：醵mg撕-li Supervisor：D1lGuo-qia士lg Abstract to T}le factor wasconsiderodtorelatedcoldhardness trans谢ptiOnCBF鹭锄e，whjch tran8t’erredinto stockandcultivarofGala induction，was apple M26 v妇爿gr。6“cferfHm EHA bud and str醚n 105．_rheadventitious system 赴埘理胁cf8黜of regen钟ation