抗除草剂bar因工程菌构建与草莓叶片再生体系的研究.pdf

中文摘要 为探索草莓抗除草剂bar基因转化高效方法，试验利用三亲杂交法，将构建的真 粒双酶切产物进行电泳检测，用构建的工程菌转化草莓试管苗。并且本试验以适合安 ananassa 徽省栽培的草莓(FragariaDueh)优良品种——丰香为试材，通过对叶片愈 伤组织诱导、生根培养筛选研究，建立起草莓简单、快速、高效的叶片离体再生体系， 为草莓利用发根农杆菌进行抗除草剂bar基因转化研究奠定基础。 ’ 试验研究获得的主要结果如下： 21-bar转入根癌农杆菌LBA4404，通过 1、利用三亲杂交法将真核表达载体pBll 菌落PCR、质粒PCR、质粒双酶切电泳检测，证明工程菌构建成功。 2、试验筛选出草莓试管苗、叶片愈伤组织分化阶段的适宜选择压分别是浓度为 25 mg／L和20mg／L的卡那霉素。 3、对工程菌进行抗生素浓度的筛选，Cef与Carb有效抑菌浓度均为200 mg／L。 4、不同6-BA、NAA组合对草莓叶片不定芽无诱导作用，只能诱导愈伤组织。 5、应用SPSS软件分析，得出诱导叶片不定芽的最佳培养基是：MS+TDZ 0．4 1．5m∥L+ⅢAmg／L。 0．1 6、丰香生根的最适培养基分别为是：1／2MS+IBA mg／L。 7、对发根农杆菌R1601抑制抗生素Carb浓度筛选，Carb有效除菌浓度为500 mg／L。 最高，而高于或低于该密度，诱导率都呈下降的趋势。 关键词：草莓，真核表达载体pBll21．bar，LBA4404，工程菌，叶片再生 Abstract For efficientmethodfor ananassaDueh) exploring s竹awberry(FragaHa anti—herbicidalbar Genetransformation the byAgrobacteriumtumefaciens triparental WaSdonetotransform vectorinto matinghybridization eukaryoticexpression LBA4404．The of PCRand Agrobacteriumtumefaciens productsmyceliumPCR，plasmid XbaIandBamHI weretested plasmiddigestedby enzyme by constructed wasculturedwith of projectAgrobacterium planfletstrawberry．Thestrawberry in cultivars cultivatedAnhuiProvinceweretakenasma