三种褐藻中岩藻糖硫酸酯的纯化及结构分析.pdfVIP

Thesis for the Degree of Master Studies on the purification and structural characteristics of fucoidan from Costaria costata. Saccarina japonica , Kjellmaniella crassifolia Supervisor: Prof. Wang Qiu-kuan Master Candidate: Liu Shu COLLEGE OF FOOD SCIENCE AND ENGINEERING, DALIAN OCEAN UNIVERSITY DALIAN, LIAONING PROVINCE, CHINA JUNE 2013 摘要 摘要 多肋藻、日本真海带与厚叶解曼藻是具有较高经济价值的三种褐藻，岩藻聚糖硫酸酯 (Fucoidan)也称褐藻多糖硫酸酯、褐藻糖胶，主要存在于多种褐藻中，是一种水溶性的硫酸 杂多糖，具有多种生物活性，是海洋生物活性物质的研究热点。本研究以此三种褐藻为原 料，用DEAE-Sepharose Fast Flow 弱阴离子交换层析分离纯化岩藻聚糖硫酸酯，分别得到 4 、3、4 种组分。对各组分的总糖、硫酸基、岩藻聚糖硫酸酯含量进行了测定和对比；并 对比分析了其分子结构。 通过对多肋藻、日本真海带和厚叶解曼藻进行复合酶解提取，乙醇分级沉淀法纯化， 制备得到岩藻聚糖硫酸酯产品CF、SF 和KF ；利用DEAE-Sepharose Fast Flow 弱阴离子交 换层析对岩藻聚糖硫酸酯进行分离纯化。多肋藻经分离纯化得到四个组分CF1、CF2、CF3 和CF4，多糖组分主要集中在盐洗脱部分，其得率分别为2.81% 、27.55% 、11.44%、23.48%， CF2 为低硫组分，其硫酸基含量为1.01%，CF4 为高硫组分，硫酸基含量为16.12%；日本 真海带经分离纯化得到三个组分SF1 、SF2 以及SF3 ，多糖组分也主要集中在盐洗脱部分， 得率分别为 12.95%、63.71%、15.70%，其中 SF2 为低硫组分，其硫酸基含量为 5.56%， SF3 为高硫组分，硫酸基含量达高达27.08% ；厚叶解曼藻经分离纯化得到四个组分KF1 、 KF2 、KF3 以及KF4 ，多糖组分全部集中在盐洗脱部分，各组分分别占组分总量的4.41% 、 18.98%、4.04% 、57.45%，其中KF1 为低硫组分，其硫酸基含量为 4.27% ，KF4 为高硫组 分，硫酸基含量达高达29.31% 。 经Sephadex G200 凝胶柱分离可知，真海带和厚叶解曼藻所得组分SF1 、SF2 、SF3 、 KF1 、KF2 、KF3 和KF4 组成单一，分子量分别约为48 KD 、146 KD、155 KD，136 KD、 136 KD、119 KD、104 KD；多肋藻所得组分CF1、CF2 和CF4 的分子量约为52 KD、5 KD 和94 KD ，其中CF3 经凝胶柱层析分离后得到两个峰，即CF3-1 和CF3-2 ，表明CF3 组分 纯化程度较差，两个组分分子量约为103KD 和5KD 。 对11 个组分进行气相色谱、红外光谱以及核磁共振波谱分析。经气相色谱分析各个组 分的单糖组成，结果表明：其中9 个组分主要是由岩藻糖、半乳糖、甘露糖及少量的木糖、 葡萄糖五种单糖组成，单糖组成与大多数褐藻相似，真海带SF3 及厚叶解曼藻KF4 单糖组 成单一，仅含岩藻糖(100%) ；三种褐藻中，硫酸基含量及岩藻糖含量最高的均为CF4、SF3 、 KF4 。经红外光谱分析，结果表明：3450-3300 cm-1 附近出现的O-H 伸缩振动峰，是糖类 ﹣ ﹣ 共有的；2935 cm 1 附近的是C-H 伸缩振动峰，是岩藻糖中甲基的吸收峰；1250cm 1 附近 有强吸收峰，是硫酸基(S=O) 的吸