肝细胞肝癌相关基因的筛检.pdf

中文摘要 肝细胞肝癌相关基因的筛检 摘 要 第一部分应用基因芯片技术对肝细胞肝癌、肝硬化和正常肝组织中差异 表达基因的检测 目的：应用基因芯片技术，分别检测肝细胞肝癌与正常肝组织之间 及肝硬化与正常肝组织之间基因表达谱的差异，对差异表达的基因进行分 类汇总，并分析他们的生物学信息，为肝癌的诊断治疗提供帮助。 方法 1研究对象： 河北医科大学第四医院肝胆外科手术切除，并经病理学检 查证实的，单发无转移的肝细胞癌病人癌组织4例，肝硬化病人硬化肝组 织I例，肝血管瘤周边正常肝组织1例。所有患者术前均未进行任何形式 的治疗。 2研究方法：组织手术切除后，迅速放入液氮中冷冻，之后转入．80。C冰 箱备用。用Trizol～步法分别提取肝癌癌组织、硬化肝组织及正常肝组织 探针，与含有4096个基因的人表达谱芯片杂交，用GenePixPr03．0图像 分析软件分析硬化肝组织与正常肝组织，肝细胞癌组织与正常肝组织的基 因表达情况。将结果进行汇总，并在网上基因库查询相关基因生物学信息。 结果 1肝细胞癌组织与正常肝组织之间及肝硬化组织和正常肝组织之间的基 因表达谱差异明显。 2在癌组织中表达情况一致并且与正常肝组织比较有差异的基因有141 条，占基因总数的3．5％，其中上调的有51条，下调的有90条。上调的 基因功能多数与细胞增殖及细胞信号转导有关，其中包含许多新近发现的 能多数与物质代谢有关；在4例肝癌组织和1例肝硬化组织中表达情况一 致并与正常肝组织表达情况相比较有差别的基因有23条，占基因总数的 O．6％，其中上调的有7条，下调的有16条。基因功能多数与细胞增殖和 中文摘要 织中表达情况相反并且与正常肝组织比较有差异的基因有2条，均属于金 属硫蛋白基因家族成员。另外，尚有一些目前功能未明的基因有待于进一 步研究。 结论：使用基因芯片技术可以一次性、平行的比较不同组织的表达 谱差异，因此，这种技术能够对肿瘤研究提供很大的帮助。借助这一技术， 本研究发现了大量与原发性肝细胞肝癌形成有关的基因群，其中，许多基 因都与细胞周期的调控和信号转导有关，另外尚有部分功能未明的基因。 对这些基因进行系统的研究将有助于阐明肝癌的发生机制、发现新的早期 诊断指标、指导治疗方案和预后评估。 第二部分部分差异表达基因的半定量RT-PCR检测 目的：从芯片结果中选取部分在不同病变肝组织中表达有差异的基 因，同时增大各组样本的例数，用半定量RT-PCR技术来比较这些基因在 肝细胞肝癌、癌旁硬化肝组织及正常肝组织中的表达情况，来验证芯片结 果的可靠性，并初步探讨这些基因与肝细胞肝癌之问的关系。 方法 1研究对象：河北医科大学第四医院肝胆外科手术切除，并经病理学检 查证实的19例肝细胞肝癌病人癌组织，11例癌旁硬化肝组织及7例肝血 管瘤周边正常肝组织。所有患者术前均未进行任何形式的治疗。从芯片结 果中选取在各组中表达有差异的基因：MT3、14．3．3蛋白基因家族成员 在上述组织中的表达情况。 2研究方法：分别提取肝癌癌组织、癌旁硬化肝组织及正常肝组织的总 作为内参照，比较上述基因在各组中的表达情况。将这些基因的表达情况 与肝细胞癌患者的临床表现相结合，初步探讨这些基因与肝细胞肝癌之间 的关系。 结果 l 肝癌组织中MT3基因的表达显著低于癌旁硬化肝组织和正常肝组织 表达水平越低。MT3在癌旁硬化肝组织中的表达水平虽然高于正常肝组 织，但无统计学意义。 中文摘要 2肝癌组织中14．3．3Y基因的表达显著低于癌旁硬化肝组织和正常肝组 (庐O．05)。 3肝癌组织中MCM7基因的表达显著高于癌旁硬化肝组织和正常肝组 结论 1 MT3基因与肝细胞肝癌的形成关系密切，其表达水平能够反映肝癌的 恶性程度。 2 14—3．3基因家族调控网络的失调在肝癌的形成过程中发挥了一定的作 用。其作用机理有待于进一步研究。 3 MCM7基因在肝癌组织中的表达水平显著升高，并与肝癌的分化程度 成负相关，有望作为肿瘤增殖标志物。RBL2／P130抑癌基因的失活推动 了肝癌的发生。 4肝癌的发生、发展是个复杂的病理过程，其间有大量的基因发生了改 变，这些基因之间又可能存在着千丝万缕的联系，对这些基因进行系统的 研究将有助于肝