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snmRNA 参与基因表达的调控（small non-messenger RNA） 核内小RNA（ Small nuclear RNA） 核仁小RNA（ small nucleolar RNA） 胞质小RNA （ small cytoplasmic RNA, scRNA） 催化性小RNA（ small catalytic RNA） 小片断干扰 RNA（ small interfering RNA） 功能： 在hnRNA和rRNA的转录后加工，转运以及基因表达过程的调控等方面具有重要的生理作用 核酸在真核与原核细胞中的不同时空特性 紫外吸收 变性、 复性与杂交 第四节、核酸理化性质 一、核酸的紫外吸收 根据A260/A280的比值判断核酸样品的纯度 纯DNA：A260/A280=1.8 纯RNA：A260/A280=2.0 纯的核酸样品可根据260nm的光吸收值算出其含量 若260nm光吸收值为1 相当于50μg/ml双螺旋DNA 或相当于40μg/ml单链DNA或RNA 或相当于20μg/ml寡核苷酸。 二、DNA的变性(denaturation) 定义：在某些理化因素作用下，DNA双链解开成两条单链的过程。 因素：过量酸，碱，加热，变性试剂如尿素、 酰胺以及某些有机溶剂如乙醇、丙酮等。 变性后其它理化性质变化： 粘度下降 DNA双螺旋是紧密的刚性结构，变性后转化成柔软而松散的无规则单股线性结构，因此粘度明显下降。 比旋度下降 变性后整个DNA分子的对称性及分子构型改变，使DNA溶液的旋光性发生变化。 OD260增高 增色效应(hyperchromic effect)：指DNA变性后其紫外吸收 明显增强的效应。 减色效应：DNA复性时，其溶液OD260降低。 在DNA双螺旋结构中碱基藏入内侧，变性时DNA双螺旋解开，于是碱基外露，碱基中电子的相互作用更有利于紫外吸收，故而产生增色效应。 DNA变性的本质：维持双螺旋稳定性的氢键断裂，碱基间的堆积力遭到破坏，但不涉及到其一级结构(磷酸二酯键)的改变。 更具典型意义 加热引起的DNA变性称为～。 由于DNA的热变性是加热引起DNA双螺旋结构解体 成为单链的过程,所以又称为DNA解链或融解作用. DNA的热变性 80 90 100 100% 50% OD260（254） Tm 变性温度范围 ① ② ③ ℃ Tm：变性是在一个相当窄的温度范围内完成，在这一范围内，紫外光吸收值达到最大值的50%时的温度称为DNA的解链温度，又称融解温度(melting temperature, Tm)。。 影响Tm值的因素 1、G-C的相对含量 G+C的含量高，Tm高（因G- C之间有三个氢键， A-T有两个氢键，故G-C较A-T稳固）。 2、核酸分子长度 核酸分子越长，解链时所需能量越高，Tm值越大 3.与离子强度有关：溶液的离子强度较低时，Tm值较低，熔点范围也较宽，反之亦然。 三、核酸的复性与分子杂交 DNA复性(renaturation)的定义 在适当条件下，变性DNA的两条互补链可恢复天然的双螺旋构象，这一现象称为复性。 热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性，这一过程称为退火(annealing) 。 不同来源的核酸变性后合并在一起进行复性。只要这些核酸分子的核苷酸序列中含有可以形成碱基互补配对的序列，彼此之间即可形成局部双链，即所谓的杂化双链(heteroduplex)。这个过程叫杂交或核酸分子杂交。 核酸分子杂交(hybridization) 是以核酸的变性和复性为基础的。 探针（probe)：采用同位素或其它发光物质标记一小段已知序列的核酸，通过杂交反应就可以确定待测序列中是否含有与其相同的序列。这段已知序列的核酸称为探针。 DNA－DNA(Southern Blot ） DNA－RNA（Northern Blot ） RNA－RNA。 分子杂交的应用 细菌、病毒、肿瘤、分子病等的诊断 如地中海贫血、分子病 遗传病的产前诊断 杂交和探针技术是许多分子生物学技术的基础，在生物学和医学的研究中，以及临床诊断中得到了日益广泛的应用。 第五节 核酸酶 核酸酶是所有可以水解核酸的酶。 DNA酶(deoxyribonuclease, DNase) RNA酶(ribonuclease, RNase) 根据底物的不同，可分为 根据对底物的作用方式不同，可分为 核酸外切酶（exonuclease）: 5’-3’, 3’-5’ 核酸内切酶（endonucle