FXYD5基因真核表达载体的构建及其功能的初步研究.pdfVIP

心电与循环2014 年第33 卷第 1 期 论 著 FXYD5 基因真核表达载体的构建 及其功能的初步研究 王本极 潘嘉林 黄晓燕 施翔翔 程碧环 金胜威 杨德业 [摘要] 目的 构建大鼠离子通道相关蛋白（FXYD5 ）基因真核表达载体, 研究其对大鼠胸主动脉平滑 细胞（CRL-1444 ） 的体外作用。 方法 以含FXYD5 全长cDNA 的pBluescript II KS（+ / - ）载体为模板，并用PCR 方法扩增,将其连接于真核 表达质粒pcDNA3.1（+ ），PCR、双酶切和测序鉴定后，用脂质体包裹转染大鼠胸主动脉细胞，转染 组真核表达载体为实验组 （PF 组），转染空质粒PCDNA3.1（+ ）为阴性对照组（NC 组）和未做处理的为空白对照组（BC 组）。Real-time PCR 定量检测各 + + 组FXYD5 的表达水平，并研究该基因对CRL-1444 细胞膜钠钾泵（Na -K -ATPase ）活性、细胞增殖能力、迁移力的影响。 结果 组的真核表达载体pcDNA3.1（+ ）-FXYD5 构建成功, PF 组FXYD5 的表达水平较 BC 组上调 17.312 倍（P 0.05 ）， + + PF 组的细胞膜Na -K -ATPase 活性高于BC 组和NC 组（均P 0.05 ），细胞增殖能力和迁移力均高于NC 组（均P 0.05 ）。 结论 成功构建了真核表达载体pcDNA3 .1（+ ）-FXYD5 ，并在CRL-1444 细胞中使FXYD5 基因的表达水平增加，且增强 + + CRL-1444 细胞膜的Na -K -ATPase 活性、细胞增殖和迁移能力。 [关键词] 真核表达载体； 血管平滑肌细胞； 钠钾泵 Construction of eukaryotic expression vector of rat FXYD5 gene and preliminary study of its function WA NG Benj i, PAN Jialin, H UA NG X iaoyan, et al. Department of Intens iv e Care Unit, the Second Affili ated Hosp ital of Wenz hou Medical Univ ers ity, Wenz hou 325000, China Corresp onding author: YANG Deye, E-mail: deyeyang@126.com [Abstract] Objective To construct eukaryotic expression vector of pcDNA3.1 (+)-FXYD5 gene and explore its effect on rat vascular smooth muscle cells(CRL-1444). Methods The pBluescript II KS (+/-) vector which contained full-length FXYD5 cDNA was amplified by PCR, and cloned into pcDNA3.1 (+) plasmid. The recombinant plasmid was verified by PCR, double enzyme digestion analysis and DNA sequencing. CRL-1444 cells were transfected with pcDNA3.1 (+) -FXYD5 using Lipofectamin 2000 as experimental group(PF), transfected with PCDNA3.1(+) as negative