FIASCO法筛选鳜鱼微卫星标记.pdfVIP

第14卷第4期 中国水产科学 Vd．14No．4 2007年7月 of SciencesofChina July2007 JournalFishery FIASCO法筛选鳜鱼微卫星标记 匡刚桥1，一，刘臻1，鲁双庆1，刘红玉3，张建社1，唐建洲1 环境科学与工程系，湖南长沙410082) IsolationAFLP 摘要：通过FIASCO(Fastby sequencesContainingrepeats)法构建鳜鱼(Sinipercachuatsi)基因组微卫星富 800 集文库，分离微卫星DNA序列并对其特征进行分析。鳜鱼基因组DNA经MseI限制性内切酶消化后，选取200bp的 物结合到包被有链霉亲和素的磁珠上，变性洗脱获得单链目的片段，经PCR扩增形成双链，然后克隆到pGEM-T载体 Accession 卫星序列(GenBank 行PCR扩增，结果筛选出18个多态性微卫星标记。结果表明：FI僦法能有效提高筛选微卫星标记的效率。本研究 筛选的微卫星标记可以用于鳜鱼遗传背景分析和遗传连锁图谱构建，并将为鳜鱼基因组结构分析、标记辅助育种以及数 量性状位点(QTL)基因的定位等研究提供候选微卫星标记。[中国水产科学，2007，14(4)：608—614] 关键词：鳜鱼；微卫星标记；富集文库 中图分类号：C059．483文献标识码：A 文章编号：1005—8737一(2007)04—0608—07 微卫星(Microsatellite)是一类广泛存在于真核生体和养殖群体进行了RAPD分析。然而，迄今为 物基因组中的具有高度变异性的简单重复DNA序 止，尚未见有关鳜鱼微卫星标记研究方面的报道，这 列uJ。它具有按照孟德尔方式分离、多态信息含量丰 严重制约了微卫星标记在鳜鱼遗传学研究中的应 富、呈共显陛遗传等特点，并能应用于简便快速的基 用。因此，筛选多态信息含量丰富的鳜鱼微卫星标 因型检测匕J。目前，微卫星标记技术已被广泛应用于 记，分析鳜鱼群体遗传结构用于标记选择育种等，具 鲤鱼(C3rprinuscarpio al— 有重要的理论意义和应用价值。 L．)L3j、黄鳝(Monopterus bus)L4|、鲫(Carassiusauratus)L5j、虹鳟(Salmogaird— 然而，利用微卫星标记最关键的一步就是微卫 neri)[6-7J、斑马鱼(Dan／orerio)[8-9J、鲶(Silurus星位点的分离和富集。目前，常用的富集微卫星标 记的方法主要有3种：①构建目标生物小片段插入 spp．)_10_和日本对虾(Penaeusjaponicus)[11j等多种水 产动物的遗传背景分析和遗传连锁图谱构建等研究。 基因组DNA文库，通过含有重复序列的探针筛选 chuatsi)俗称桂花鱼，隶属鲈形含有微卫星的阳性克隆【13_141；②通过生物素探针 鳜鱼(Siniperca 结合链霉亲和素包被的磁珠进行微卫星DNA片段 目(Perciformes)、鳜亚科(Sinipercinae)，是原产于中 国各主要江河湖泊的珍贵淡水鱼类。随着中国鳜鱼 养殖业的迅速发展，由养殖群体的近亲交配和遗传 选微卫星[18]。其中，传统的构建小片段插入基因组 漂变所导致的种质退化越来越明显，养殖病害的暴 文库和利用磁珠富集技术筛选微卫星的方法非常繁 发日趋严重；而且由于一些鳜鱼养殖品种生长缓慢， 琐，不仅需要大量的时间和经费，而且获得微卫星的 也严重制约了鳜鱼养殖产业化的发展。鉴于鳜鱼养 效率较低【190；在当前公共核酸数据库中也没有足够 殖业的可持续发展以及恢复与保护野生鳜