β纤维蛋白原455GA基因多态性及血浆纤维蛋白原含量与过敏性紫癜肾炎的相关性分析.pdfVIP

·46 · 中国药物与临床 2015 年 1 月第 15 卷第 1 期 Chinese Remedies Clinics ，January 2015,Vol.15,No.1 β鄄纤维蛋白原鄄４５５Ｇ/Ａ 基因多态性及血浆纤维蛋白原 含量与过敏性紫癜肾炎的相关性分析 张格妙 方琪玮 过敏性紫癜 （ＨＳＰ）是以急性毛细血管炎为主的一种变态 1.２．１．２ 合成各基因引物 ： 引物由上海捷瑞生物工程有限公 反应性疾病 ［１，２］ ，呈逐年增多趋势 ，常并发肾脏损害成为过敏 司设计合成 。 引物序列 如下 ：Ｆｇβ鄄４５５Ｇ/Ａ ＧＧ 上 游序列 ： 性紫癜肾炎 （ＨＳＰＮ），是儿科最为常见的继发性肾小球疾病 ， ＴＴＡＴＣＡＣＴＧＧＡＧＣＣＴＴＴＣＣＣ ； 下游序列 ：ＴＴＴＣＣＡＡＴＡＡＡＴＧ鄄 重者导致肾纤维化、肾功能衰竭，严重影响儿童身心健康 。 杨 ＡＧＴＣＣＴＴＴＣＣ ；Ｆｇβ鄄４５５Ｇ/Ａ ＧＡ 上游序列 ：ＧＴＣＡＴＧＣＣＣＡＣＡ鄄 霁云和白克敏 ［３］报道约 ２５％～６0％小儿患者病程中有尿检异 ＣＡＡＡＴＣＴＣ ； 下 游 序 列 ：ＡＡＣＴＴＴＧＣＴＣＣＣＴＴＣＡＧＴＧＧ ；Ｆｇβ鄄 常 ，如以肾活检为准 ，则 ９０％以上有程度不等的肾脏受累。 小 ４５５Ｇ/ＡＡＡ 上游序列 ：ＡＧＧＴＴＴＣＡＧＴＧＴＴＧＣＣＣＡＴＴ ； 下游序 儿患者发病机制至今尚未完全阐明 。 近年来 ，高凝因素和遗 列 ：ＴＡＴＴＣＣＡＣＴＧＣＴＧＡＧＣＣＡＴＣ 。 传机制在 HSPN 中的研究已成为趋势，及早发现患者凝血异 1.２．１．３ ＰＣＲ 扩增 目的基因片段及确定基因型别 ：用 ＰＣＲ 方 常并加以治疗对减轻肾损害、预防并发症是十分重要的 。 纤 法扩增 Ｆｇβ 基因 ，然后用通用的 内切酶来确定各基因的突变 维蛋白原 （Ｆｇ ）为机体血浆中相对分子质量最大的蛋白 ，为机 位点及突变位点数 ；针对每个突变设计特异性探针及引物进 体止血生理中重要的凝血因子 。 β鄄纤维蛋白原 （Fgβ）鄄４５５Ｇ/Ａ 行 ＰＣＲ 扩增 ，确定标本具体型别。 使用上海达为科生物科技 多态性与高凝血栓性疾病关系 ， 以及 Fg 功能越来越引起人 公司 ＳＹＢＲ ＧｒｅｅｎＰＣＲ 试剂盒 。 ＰＣＲ 反应体系为 ５０ μｌ ，其中 们的重视 。 本课题通过检测 HSPN 患者的 Fgβ鄄４５５Ｇ/Ａ 基因 ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｍｉｘ ３２．５ μｌ ，正反引物各 ０．５ ｐl ，基因组 ＤＮＡ ２ 多态性及血清 Fg 含量 ，研究其与 HSPN 的关系 ，为临床早期 μｌ ，去离子水 １４．５ μｌ 。 ＰＣＲ 反应条件为 ：９４ ℃预变性 ４ ｍｉｎ ， 预防 、诊断和治疗 HSPN 提出新的思路 ，因而有广阔的应用 ９４ ℃变性 ６０ ｓ ，５８ ℃退火 ６０ ｓ ，７２ ℃延伸 ６０ ｓ ， 共 ３０ 个循 前景 。 环 ，７２ ℃延伸 １０ ｍｉｎ，Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ Ｍａｓｔｅｒｃｙｃｌｅｒｇｒａｄｉｅｎｔ 型热循 1 资料与方法 环仪上完成循环 。 取 ＰＣＲ 产物 ３ μｌ ，经溴化 乙锭染色的 ２％ １.1 一般资料 琼脂糖凝胶电泳 ，电压为 １００ Ｖ，时间 ３０ ｍｉｎ ，在 ＧＩＳ 凝胶图 选择 ２００７—２００８ 年儿科收治住院明确诊断的 ＨＳＰＮ 患 像处理系统中观察 ＰＣＲ 产物是否存在及确定基因型别。 儿 ６７ 例 （ＨＳＰＮ 组 ），男性 ３５ 例