反向遗传操作研究进展.pdfVIP

第 卷 第 期 东 北 农 业 大 学 学 报 39 1 39(1):134~138 2008年 月 1 JournalofNortheastAgriculturalUniversity Jan.2008 文章编号 ( ) 1005-9369200801-0134-05 反向遗传操作研究进展 1,2 2 2 2* 吴波平 ,时洪艳,陈建飞,冯 力 ( 东北农业大学生命科学学院,哈尔滨 ; 1. 150030 2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室,哈尔滨 150001) 摘 要:反向遗传操作(又称感染性克隆)为在DNA水平上研究RNA病毒的基因组结构及功能和病毒宿主相 互作用提供了重要手段。文章综述了反向遗传操作的研究策略,包括全长克隆的获得、体外转录和病毒的挽救, 概括了反向遗传操作在病毒分子生物学研究、疫苗的研制、基因治疗和重组载体中的应用,分析了当前反向遗传 操作研究中存在的问题。 关键词:反向遗传操作;感染性克隆;全长克隆;体外转录;病毒挽救 中图分类号:Q785 文献标识码:A RNA病毒的反向遗传操作,即构建RNA病毒 1.1 全长cDNA的构建 的DNA副本,并在 DNA水平对病毒基因组进行 微基因组由于只含有一个小的报告基因,因而 定向修饰,模拟真实病毒粒子的生命周期,研究 便于进行分子生物学操作,为探索和优化病毒拯救 病毒的基因组结构及功能和病毒宿主相互作用。 条件提供了有力手段。因此在研究病毒拯救之前, RNA病毒突变率较高,直接对其进行定向操作比 一般构建微基因组衡量病毒拯救的效率,其中最早 [2] 较困难。基于 水平的反向遗传操作为研究 的微基因组挽救模型是水泡性口膜炎病毒( )。 DNA VSV RNA病毒的复制及调控机理、病毒毒力、病毒- 构建全长cDNA的方法主要有长距离PCR、融 宿主相互作用和研制新型疫苗等提供了重要手段。 合PCR、体外cDNA连接和全长克隆拼接。长距离 [1] 自1978年第一例反向遗传操作获得成功后 ,一 PCR的缺点是Taq酶固有的错配率,造成PCR扩 系列RNA病毒的反向遗传操作研究捷报频传。本 增过程中不可避免的基因突变。融合PCR的缺点 文概述了反向遗传操作的策略、应用及目前存在 在于多次PCR造成的突变很大,现在多不采用此 的问题。 法构建全长克隆。体外cDNA连接虽然能最大限度 地减少 PCR扩增过程中的错配,但多次拼接对 1 反向遗传操作策略 [5] DNA的损伤和损失也应该引起注意 。现在广泛使