D0061哺乳动物基因组DNA抽提试剂盒.pdfVIP

哺乳动物基因组DNA抽提试剂盒 产品编号 产品名称 包装 D0061 哺乳动物基因组DNA 抽提试剂盒 50次 产品简介：  碧云天生产的哺乳动物基因组DNA抽提试剂盒(Mammalian genomic DNA extraction kit)，采用了经典的蛋白酶K处理法， 可以抽提到100-150kb以上的基因组DNA 。  用本试剂盒抽提到的基因组DNA适用于Southern杂交、基因组DNA 的PCR扩增及基因组DNA文库的构建等。 6 7  通常使用本试剂盒，从20毫克组织可以抽提到约40微克基因组DNA ，从10 -10 Hela细胞可以抽提到约5-50微克基因组 DNA 。  本试剂盒足够抽提50个常规量的样品。 包装清单： 产品编号 产品名称 包装 D0061-1 样品裂解液 30ml D0061-2 蛋白酶K 130μl D0061-3 10M 醋酸铵 6ml D0061-4 Nuclease Free Water 6ml — 说明书 1份 保存条件： -20 ℃保存，一年有效。10M 醋酸铵和Nuclease Free Water也可以室温保存。 注意事项：  需自备Tris平衡苯酚、氯仿和无水乙醇。  如果打算抽提到大片断的基因组DNA ，则要尽量避免基因组DNA 的物理性剪切。例如避免剧烈振荡含有基因组DNA 的样 品，可以用剪掉枪头尖的枪头吸取含有基因组DNA 的样品。  不可过分干燥基因组DNA沉淀，否则会极难溶解。  为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 使用说明： 1. 样品收集 a) 对于组织样品： 切下组织，并剪切成小块，置液氮中冻结，研碎或捣碎。 b) 对于贴壁细胞： 胰酶消化后，PBS或生理盐水洗一次，1000-2000g离心1-2分钟，弃上清，收集细胞。 c) 对于悬浮细胞： 1000-2000g离心1-2分钟，弃上清，收集细胞。 2. 基因组DNA抽提 a) 样品处理完毕后，每1毫升样品裂解液中加入5微升蛋白酶K，混匀。 6 7 b) 对于上述处理好的样品，每20毫克组织或10 -10 个细胞中加入500微升添加了蛋白酶K 的样品裂解液，颠倒混匀数 次，充分裂解组织或细胞。 c) 50℃水浴消化过夜。 d) 加入500微升Tris平衡苯酚抽提样品。 e) 吸出酚相及中间相(可以吸除少量靠近中间相的水相液体)，剩余的水相用等体积Tris平衡酚再抽提一次。 f) 吸出酚相及中间相(可以吸除少量靠近中间相的水相液体)，剩余的水相用等体积氯仿再抽提一次。 g) 吸出约300微升上清液，加入60微升10M醋酸铵和600微升无水乙醇，颠倒数次混匀，此时可见DNA沉淀产生。 h) 10, 000g 离心1分钟，弃上清。加入70% 乙醇洗涤DNA沉淀两次。 i) 尽量吸除残余的乙醇，待看不到明显的液体时，立即加入50-100微升Nuclease Free Water溶解DNA 。注意：不可过分 干燥基因组DNA沉淀，否则会极难溶解。如果发现DNA沉淀难以溶解，可以在4 ℃用摇床缓慢摇动过夜，以溶解 DNA沉淀。 使用本产品的文献： 1. Liu Z, Li T, Liu Y, Jia Z, Li Y, Zhang C, Chen P, Ma K, Affara N, Zhou C. WNT signaling promotes Nkx2.5 expression and early ca