实验性胃肠道功能紊乱症G、D细胞变化意义.pdfVIP

实验性胃肠道功能紊乱症G、D 细胞变化意义 姚永莉宁于剐张万岱 第一军医大学南方医院全军 消化内科研究所(广州510515) 胃肠激素作为调节肽在人体有着广泛的分布，对胃肠生理功能有着重要的调节作 用。已有研究表明，胃肠道功能紊乱的发生与胃肠激素关系密切。国内研究多局限于血 浆胃肠激素的放射免疫检测，且各家报道不相一致。本研究从形态学角度探讨G、D细胞 与胃肠道功能紊乱发生的关系，为揭示胃肠道功能紊乱与胃肠激素关系的本质作铺垫。 材料和方法 1．1材料 利血平注射液由上海医科大学红旗制药厂生产，批号960313；四君子汤 由人参、自术、茯苓、炙甘草四味中药组成，拄常法煎煮两次，滤出药液4℃冰箱储存备用。 兔抗一胃泌索和兔抗一生长抑素购自扔m缆D公司，免疫组染色阱叮M试剂盒购自中山 生物技术有限公司，Q∞ntimet500图象分析系统购自Leica。 1．2动物及分组 选用30只健康成年雄性SD大鼠，体重2459一2559，饮食不限。 适应性饲养3d后，随机分成以下5组，每缀6只。正常对照组A：生理盐水O．5mL 自然恢复组D：按胃肠道功能紊乱模型组方法制模14d成型后，于每日09：00，16：00蒸馏 水2rnL做，谊，继续观察6d。中药治疗组E：按胃肠道功能紊乱模型组方法制模14d成型 后，四君子汤2mL／次，g，时间同前。继续观察6d。 1．3标本制备 各组大鼠制模结束后禁食16h，断头处死取胃窦组织、胃与十二指肠 交界下1cm处1cm长的十二指肠组织各一块，固定于4％多聚甲醛，常规4um连续切片， 参照试剂盒说明进行免疫组化染色，在相邻切片上分别显示G、D细胞。对照片用PBS 代替第一抗体，其余步骤与试验片相同。 1 4G、D细胞的定量分析免疫组化标记G细胞的每张切片在高倍镜(10×40)下， 随机将5个枧野的图象由电视摄象系统输人图象分析系统(MTPs)的主计算机，在电视 监视器显示下由主计算机系统进行二值图像处理，涮量G细胞的数目、面积及胞体平均 灰度值。取与G细胞楣邻的经免疫组化标记D细胞的切片，用上述方法测量井计算每张 切片的D细胞数、面积及胞体平均灰度值。G／D细胞鼓及G／D细臆面积比值，是将显示 G、D细胞的相邻切片中的G细胞数及G细胞面积分别除以D细胞数和D细胞面积而 得。 1．5统计学处理 全部数据用x±S表示，处理组闯数据行方差分析，均数间两两比 较用鼽ld凹t—N翱嗍一Keuls法。 结 果 2．1G、D细胞的形态学观察胃窦G细胞主要分布于胃窦粘膜的中、下l／3，偶见于 粘膜上部。其形态星圆形、椭圆形、棱形、三角形或不规则形，有的G细胞发出细长突起， 末端呈棒状，伸向邻近细胞，有的细胞顶部可达腺腔，D细胞主要分布于胃窦粘膜的下l／ 3，偶见于粘膜中、上部，形态与G细胞相似。十二指肠G细胞分布予十二指肠粘膜的肠 腺中，夹于其它细胞之间。其形态呈不甚规刚的圆锥形，有的G细胞基底侧面发出细长 突起，末端呈棒状，伸向邻近细胞。D细胞也分布于十二指肠粘膜的肠腺中，夹于其它细 胞之间，形态与G细胞相似。 2．2G、D细胞的MIPs定量分析结果详见表1^一3 表1胃窦粘膜中G、D细胞MIPs定量分析 98．05±7．06125．4l±22915．67±5．2170．49±8．96124．04±3．14 A103．60±12．33 93．盯±6．55128．24±303‘5．70±1．32^54，41±5．2于115．38±2．62I B加．33±5．535 123．27±2．26b C_72 94．3l±5．77125．90±313bll20±2．55Bb61．05±7．1王lb 70±lO．14lb D50．63±7．54妇87．54±8．92山123．15±409蜘30±1．86妇43．54±5．06K123．27±2．26b 1