应用PCR-CTPP技术探讨GSTO1基因多态性燃煤污染型地方性砷中毒的关系.pdfVIP

生国丝左瘟兰盘鲞2Q!!笙!Q旦垫旦筮≥Q查￡b也』星趔墅过，Q型进塑2Q：2Q!!。y丛：3Q -85· 化水平。5-AZA—dC、ISA分别作用于NaAs02处理和组蛋白去乙酰化共同介导了MGMT基因mRNA 细胞后，与仅染砷的阳性对照比较，随剂量增加， MGMT基因mRNA转录及蛋白表达均逐渐增强。提达上调，参与了此表观遗传学调控过程。砷所致 MGMT基因表观遗传学特征性改变是砷中毒发生 示5-AZA—dC、TSA能有效回复NaAs02处理细胞中 MGMT基因mRNA转录及蛋白表达。 发展乃至砷致癌的重要分子机制。砷中毒患者外周 血淋巴细胞中MGMT基因高甲基化检出为其成为 5-AZA—dC作用于NaAs02处理细胞后，与仅染 砷的阳性对照比较，DNMTI蛋白表达逐渐降低，而砷病情进展或砷致癌早期发现的生物学标志提供 HDACI蛋白表达无明显变化；TSA作用于NaAs02 处理细胞后．与仅染砷的阳性对照相比，DNMTI、及癌变皮肤组织中高表达可作为砷致皮肤癌变的 HDACl蛋白表达均有不同程度的降低。提示5一早期预警信号。DNA甲基转移酶抑制剂能有效逆转 AZA—dC能抑制DNMTl蛋白表达。TsA能抑制砷所致的MGMT基因启动子区DNA高甲基化．组 DNMT!及HDACl蛋白表达。而5_AZA．dC和TSA分蛋白去乙酰化酶抑制剂能有效回升砷所致的 别作用于NaAs02处理细胞后，DNMTI、HDACI基MGMT基因转录调控区组蛋白低乙酰化水平．进而 因mRNA转录与阳性对照比较差异无统计学意义。 回复MGMT基因mRNA转录及蛋白表达．为砷中 3结论 毒治疗提供了新的思路和方向。 体内外研究证明。MGMT基因DNA高甲基化 应用PCR—CTPP技术探讨GST01基因多态性 与燃煤污染型地方性砷中毒的关系 梁冰t张爱华-董学新： (1．贵阳医学院毒理学教研室，贵州贵阳550004；2．中国人民解放军第44医院。贵州贵阳550009) 谷胱甘肽硫转移酶(Glutathione—S—transferases，人为砷中毒组，以距病区约13km非砷污染邻村的 GST)是参与毒物、致突变物、致癌物及其他外源化 130例健康居民为对照组，两组居民均为汉族。 学物在体内代谢的主要代谢酶．其家族成员由多种 1．2方法：采用酚一氯仿法提取基因组DNA，采用 基因组成。GSTO基因是近年来被发现的GST成员， 参与了人类致癌物砷的代谢。GSTO基因存在为数Glul55AGlu多态位点进行扩增，参照文献合成两 不多的被人群资料证实的多态性位点，本研究在既 对引物，引物序列：F1：5 往对GsTO基因多态性研究基础上采用双相引物一 ChainReaction—with 聚合酶链反应(Polymerase Primers，PCR—CTPP)技术对 ConfrontingTwo—pair GST01Glul55AGlu多态位点进行检测．为砷中毒应条件为：95℃预变性10min，95℃变性1rain，63℃ 易感人群的筛选和保护提供实验依据。 退火1min。72℃延伸lmin，30个循环；72℃延伸 5 V电压 l材料与方法 min。PCR产物经2．O％的琼脂糖凝胶120 1．1 观察对象：以本课题组既往动态追踪的燃煤型 电泳45min。凝胶成像仪观察并拍照，判断基因型。 11．5统计学软件进行数 砷中毒病区一贵州省兴仁县交乐村130例砷中毒病 1．3统计分析：采用SPsS 据分析。x2检验比较各基因型在病例组与对照组之 基金项目：国家自然科学基金30460123)：贵州省科