乙肝肝硬化患者MSC生物学特性研究.pdfVIP

第十三届全国普通外科学术会议论文汇编 乙肝肝硬化患者MSC的生物学特性研究 中山大学附属第三医院肝胆外科广州510630 中山大学干细胞与组织工程研究中心广州 510089 钟跃思林楠汤照峰刘波邓美海汤照峰项鹏许瑞云 通信作者：许瑞云，Emaih xuruiyun@yahoo．com．cn 【摘要】目的研究乙肝肝硬化患者骨髓间质干细胞(CIR—MSC)的生物学特性，为其I临床应用提供 CIR—MSC的增殖力明显低于ND—MSC，两者P2累积扩增率分别为(CIR—MSC VS．24±3×103(P=0．01)；两者P3累积扩增率分别为(CIR—MSCVS．ND—MSC)41±9×103vs．210± 6l×103(P0．001)。CIR—MSC较易老化，CIR—MSC CIR．MSC的增殖能力受损，细胞容易出现老化及凋亡，细胞表面生长因子受体表达下降。乙肝肝硬化患者 自体骨髓间质干细胞移植治疗肝硬化可能不是最佳选择。 慢性乙型病毒性肝炎及肝硬化状态可并发多种全身性疾病，如外周血树突状细胞功能低下、胆管上皮 相比，其增殖能力明显下降，细胞扩增慢，细胞的传代比较困难，并且细胞容易老化。那么，CIR．MSC是 殖能力下降是否对其细胞治疗作用产生影响?因此，研究CIR—MSC的细胞生物学特性具有重要意义。 致瘤性和细胞核型是否发生了改变，CIR．MSC是否感染HBV，为进一步的临床研究和应用建立实验依据。 材料与方法 一、材料 (一)试剂及药品 品；Antibiotic—Antimycotic：含penicillin(10000u／m1)，streptomgcin(1 m1)：GIBCO BRL公司产品；Vitamin 产品：DMSO(Dimethgl A， SUBSTRATEB， CITRATE 品；SSPEconcentrate，SDSconcentrate，SUBSTRATE Biotech，ltdUK．；DNA提取试剂盒：QIAGEN： invitrogenDynal (二)主要试剂的配制 1．D-Hank’S缓冲液：NaCI 8．Og，KCl0．49，Na2HP04-2H200．1519，KH2P04O．069，NaHC03 0．359。 加入去离子双蒸水800ml，搅拌均匀，定容至1000ml，经0．22um纤维滤膜负压抽滤除菌，4C保存。 2．PBS缓冲液1000ml：NaCI 8．59，KCl0．29，NaH2P04·12H202．859，KH2P040．279。加入去离子双蒸 第十三届全国普通外科学术会议论文汇编 um纤维滤膜负压抽滤除菌，4℃保存。 水800ml，搅拌均匀，定容至1000ml，经0．22 胎牛血清：经正压滤器过滤除菌后分装，一20℃保存。 3．79，PH值至 la 7．2．7．4之间，定容至1000ml，0．22m的纤维滤膜负压抽滤除菌，4C保存。 4．H．DMEM基础培养液：称取NaHC03 Antibiotic—Antimycotic urdmL，两 u IX 性霉素0．25 m过滤除菌，分装，4℃保存。 rdmL，调PH值为7．4，0．22 6．0．25％胰蛋白酶：胰蛋白酶0．259，NaCl Il 容至10(hnl，0．22m的纤维滤膜过滤除菌。 7．细胞冻存液：L—DMEM培养基、二甲基亚砜和胎牛血清按7：1：2的体积混合而成，配制后抽滤除 菌，4C保存。