GB/T 5009.198-2003贝类　记忆丧失性贝类毒素软骨藻酸的测定.pdf

】〔5 67.040 C 53 G(黔 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 GB/T5009.198-2003 贝类 记忆丧失性贝类毒素软骨藻酸的测定 Shellfishes-Testmethodofdomoic.acidinamnesicshellfishpoisoning 2003-08-11发布 2004-01-01实施 华 人 民 共 和 国 卫 生 部 国国家标准化管理委员会 GB/T5009.198-2003 前 言 本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。 本标准由中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局、卫生部食品卫生监督检验所负责起草。 本标准主要起草人:卫锋、王竹天、陈明生、王玉萍、唐守亭。 cs/T5009.198-2003 贝类 记忆丧失性贝类毒素软骨藻酸的测定 1 范围 本标准规定了海产双壳类贝肉、贝柱、外套膜及其制品的记忆丧失性贝类毒素软骨藻酸检验的抽 样、制样和液相色谱测定方法。 本标准适用于海产双壳类贝肉、贝柱、外套膜及其制品(不包括盐渍制品)的记忆丧失性贝类毒素软 骨藻酸的检验。 本标准检测限为1.。1g= 本标准线性范围为1(ag^-250pg, 2 原理 试样以甲醉/水提取，经LC-SAX强阴离子柱固相萃取((SPE)净化，用RP-HPLC定量分析。 3 试荆 3.1 甲醇:色谱纯。 3.2 乙睛:色谱纯。 3.3 三氟乙酸:优级纯。 3.4 一水柠檬酸:优级纯。 3.5 柠檬酸三按:优级纯。 3.6 乙睛+水(1+9), 3.7 0.5mol/L柠檬酸溶液(pH=3.2):40.4g一水柠檬酸和 14.0g柠檬酸三按溶解于400mL水 中，以浓氨水调pH=3.2，加人50mL乙睛，完全溶解后，以水定容至500mL, 3.8 LC-SAX柱:3mL, 3.9 标准储备液:DACS-1C(100Kg/mL)，或相当者。 3.10 软骨藻酸标准溶液:以乙睛十水((1+9)稀释标准储备液分别配成为含软骨藻酸 。.1J.0,2.5, 10.0,25.。pg/mL的标准工作溶液。 4 仪器 4 . 1 高效液相色谱仪:配有二极管阵列或紫外检测器。 4 2 . 组织均质器:最大转速20000r/min, 4 3 . 台式高速离心机:最大转速6000r/min, 4 4 . 涡旋均匀器。 4.5 超声波清洗器。 5 分析步骤 5.1 提取 称取试样5.0g(精确到 。.1g)于50mL加盖离心管中，加人 10mL甲醇+水((1+1)溶液，涡旋混 匀 1min,超声提取5min，以4000r/min离心20min，使固液两相彻底分离。移出上清液至25mL容 量瓶中，残渣再加人5mL甲醇+水((1+1)重复提取两遍，上清液均移人25mL容量瓶中，以水定容至 刻度，混匀。 565 GB/T5009.198-2003 5.2 净化 取上述提取液5.0mL移人依次经6mL甲醇,3mL水，3mL甲醇+水((1+1)处理过的LC-SAX 柱上，待液体以1滴/S的速度流出后，再依次用5mL乙睛+水((1+9),0.5mL柠檬酸洗脱液以1滴/S 的速度过柱，弃去流出液，最后用2mL柠檬酸洗脱液洗脱吸附在柱上的软骨藻酸，供HPLC测定。 注意:在液体过柱时，当液体凹液面下端与柱填料上端水平时，停止液体流出，避免LC-SAX柱填料与空气接触。 5.3 测定 5.3.1 色谱条件 5.3.1.1 色谱柱:ZorbaxSB-C,8,150mmX4.6mm(i.d),5pm，或相当者; 5.3.1.2 流动相:乙睛+0.1%三氟乙酸((13+87);