GB/T 5009.118-2003小麦中T-2毒素的酶联免疫吸附测定(ELISA).pdf

ICS 67.040 C 53 霭黔 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 GBIT5009.118-2003 代替GBIT14933-1994 小麦中T-2毒素的酶联免疫吸附测定 (ELISA) DeterminationofT-2toxin inwheatwith enzyme-linkedimmanosorbentassay(ELISA) 2003-08-11发布 2004-01-01实施 中华 人 民共 和 国卫 生 部 *， 中国国家 标准 化管理 委员会 ‘’” GB/T5009.118-2003 月叨 青 本标准代替GB/T14933-1994(小麦中T-2毒素的酶联免疫吸附测定方法(ELISA)). 本标准与GB/T14933-1994相比主要修改如下: — 修改了标准的中文名称，标准中文名称改为《小麦中T-2毒素的酶联免疫吸附测定(ELISA)); — 按GB/T20001.4-2001《标准编写规则 第4部分:化学分析方法》对原标准的结构进行 了修改。 本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。 本标准起草单位:卫生部食品卫生监督检验所。 本标准主要起草人:阳传和、罗雪云、计融。 原标准于 1994年首次发布，本次为第一次修订。 GB/T5009.118-2003 小麦中T-2毒素的酶联免疫吸附测定 (ELISA) 范围 本标准规定了小麦中T-2毒素的酶联免疫吸附测定方法(ELISA)o 本标准适用于小麦及其制品中T-2毒索的测定。 本方法的检出限为1拼9/kg。 第一法 间接法 2 原理 将已知抗原吸附在固相载体表面，洗除未吸附抗原，加人一定量抗体与待测试样(含有抗原)提取液 的混合液，竞争温育后，在固相载体表面形成抗原航体复合物。洗除多余抗体成分，然后加人酶标记的 抗球蛋白的第二抗体结合物，与吸附在固体表面的抗原航体复合物相结合，再加人酶的底物。在酶的 催化作用下，底物发生降解反应，产生有色产物，通过酶标检测仪，测出酶底物的降解量，从而推知被测 试样中的抗原量。 3 试荆 3。飞 甲醇。 32 石油醚。 3.3 三抓甲烷。 34 无水乙醉。 3.5 乙酸乙醋。 3,6 二甲基甲酞胺。 3.7 四甲基联苯胺(TMB), 3.8 吐温-20;. 3.9 30%过氧化氢(30%H2q)。 3.10 抗体:杂交瘤细胞系1n7产生的抗T-2毒素的特异性单克隆抗体。 3.11 抗原:T-2毒素与载体蛋白一牛血清白蛋白(BSA)的结合物。 3.12 兔抗鼠免疫球蛋白与辣根过氧化酶的结合物(酶标二抗)。 3.13 ELISA缓冲液系统。 3.13.1包被缓冲液为pH9.6的碳酸盐缓冲液，称取1.59g碳酸钠(Na2COs),2.93g碳酸氢钠 (NaHCOs)，加水稀释至 1000mL, 3.13.2洗液为含。05%吐温-20的pH?.4的磷酸盐缓冲液(简称为PBS-T).配制方法为: 称取0.2g磷酸二氢钾(KH2Pq),2.9g磷酸氢二钠(NaZHPO,·12H20),8.0g抓化钠(NaC1), 0.2g氛化钾(KCI),0.5mL吐温-20，加水至1000mL, 3.13.3底物缓冲液为pH5。的磷酸一柠檬酸缓冲液，配制方法为: 0.1mol/L柠檬酸CCsHa认 H2O)，即称取柠檬酸 19.