荧光定糖法测定纤维素酶活力的条件研究.pdfVIP

维普资讯 沈阳农业大学学报 ，2004—02，35(1)：59—6l JournalofShenyangAgriculturalUniversity．2004—02，35(1)：59—61 荧光定糖法测定纤维素酶活力的条件研究 李亮亮 ，牛 森 ，刘文娥 ，秦 蓁 ，李海锋 (1沈阳农业大学 分析测试中心 ，辽宁 沈阳 110161；2辽宁省动物防疫站 ，辽宁 沈阳 110161) 摘要 ：研究结果表明，荧光定糖法测定纤维素酶活力的反应最佳条件 ：反应液浓度为46．7mg·g～，反应时间为 l~rtin，反应温度 为 150~(2。将荧光定糖法与滤纸酶活测定法相结合应用于纤维素酶蛋 白组分及土壤纤维素酶活力的研究与测定。 关键词 ：纤维素酶；滤纸酶活测定法 ；荧光定糖法 中图分类号 ：Q539．3 文献标识码 ：A 文章编号 ：1000—1700(2004)01—0059—03 A FluorescenceAssay Method ofCeUulaseActivities LILiang—liang~ NIU Sen1，LIU Wen—e1，eta1． ， (』Armlysis一汹 ￡ center，ShenyangAgriadturalUnivemity，Shenyang 110161，China) Abstract：Forthe measurementoflOW concentration enzynle．tl1e filterpaperactivity and fluorescence assay methodswere combined． The standard conditionsfortl1ismethod are as follows：Th e concentration offluorecsence reagentis46 ．7mg ·g～．the reaction temper- ature is 150oC nad the incubation time jS 10 minutes．Th ismethod can solved tl1e problem ofcellulase protein isolation nad can be used to determinecellulaseactivitiesofsoils． Key words：cellulase：filterpaperactivity：fluorecsence asasy 国际上通用的总酶活力测定方法为滤纸酶测定法，这种方法适用于测定酶活力较高的样品，如酶制剂、 饲料添加剂和微生物制剂等 “。J。但在纤维素酶分离鉴定过程中需要对各个组分的酶活进行活力测定，但分 离后的组分酶活力一般较低。因此测定活力较低的纤维素酶活力 ，滤纸酶测定法灵敏度不够 ，需要找到一种 灵敏度高而且操作简单的测定方法 。荧光定糖法灵敏度高，专一性较强b ，可 以测定纤维素酶活力。本试 验拟就测定纤维素酶活力的条件进行研究，现将结果报道如下。 l 材料和方法 纤维素酶粉剂由沈阳农业大学生化教研室提供； 主要使用仪器为 日本岛津 uV一120—20型紫外可见分 光光度计和 日立 850型荧光分光光度计 ；纤维素酶活力测定采用滤纸酶活测定法bJ。 2 结果与分析 2．1 荧光定糖体 系的荧光光谱 图 ＼＼＼ 进行荧光测定首先要对其反应体系的荧光特性进行 考察，找到其特征值，再根据其特征值进行荧光测定。 本试验 以46．7mg·g 乙醇胺 +46．7mg·g 硼酸 + 50mmol·L 柠檬酸为背景体系，以46．7mg·g一 乙醇 胺 +46．7mg-g 硼酸+50mmol·L 柠檬酸十 20fig葡 萄糖为反应体系，对背景体系和反应体系进行荧光光谱 一 背景光谱曲线