浙江省钩端螺旋体PCR检测方法建立与应用.pdfVIP

维普资讯 1392 中国卫生检验杂志2007年8月第 17卷 第8期 ChineseJournalofHeal~LaboratoryTechnology，Aug2007；Vol17 No8 【论著】 浙江省钩端螺旋体PCR检测方法建立与应用 姜理平，孟真，程苏云，占利，罗芸，叶菊莲 (浙江省疾病预防控制中心，杭州 310009) [摘要] 目的：为更好的进行钩端螺旋体病监测，为预防措施提供依据。方法：建立PCR检测方法，进行灵敏度、特异性研 究。探索钩端螺旋体PCR扩增 DNA条件。对浙江省2006年分离菌 11株进行 PCR鉴定，对龙游、常山捕获的一百只鼠和 一 百只蛙肝 、脾、肾标本在提取其DNA后进行 PCR检测。结果：所建立 PCR检测方法具备较高灵敏度和较好特异性。对 2006年分离的钩体菌株进行的PCR鉴定结果与血清学鉴定结果相符。鼠和蛙肝、脾、肾标本进行PCR检测，PCR检测阳性 率 10％，钩体菌株培养分离率仅为 1％。 =15．58，P0．05有显著差异。测序及培养均能证实PCR检测结果具有特异 性。结论：钩体PCR检测方法的建立能更加准确的反映野生动物 自然带毒率。钩体PCR检测方法可推广应用。 [关键词] 聚合酶链反应；钩端螺旋体 ；监测 [中图分类号] R377．5 [文献标识码] A [文章编号] 1004—8685(2007)08—1392一o3 DevelopmentandapplicationofaPCRmethodfordetectionofleptospirainZhejiang Province J／angLi-ping，MengZhen，ChengSu—yun，ZhanLi，LuoYun，YeJu—lian (ZhejiangCenterforDiseaseControlandPrevention，Hangzhou310009，China) [Abstract] Objective：To strengthen the surveillance and provides the basisfor the preventive strategiesof leptospirosis．Methods：PCRwaschosentodetectleptospira．ThesensitivityandspecificityoftheassayWas evaluated．Optimize theamplifiedconditionofPCRandapplyittothedetectionof11isolatesofZh~iangProvincein2006．200renal，splenicandhe- paticspecimensfrom ratsandfrogsweredetectedwiththeassayaftertheextractionoftheirgenome．Results：Theapproachwe havedevelopedhashighsensitivityandspecificiyt．PCRresultsonleptospiraisolatesofZhqiangProvincein2006wereinaccord— ancewiht thatofserological detection．ByusingPCRtodetecthteplucksofratsandfrogs，thepositiverateWas 10％ whilethese- perationratewasonly1％ byusingtraditionalculturemehtod．Significantdifferenceswerefoundbetweenthem(x2=15．58。P 0．05)．Conclusion：Thedevelopedmethod ofrdetectingleptospirawithPCR isusefu1．Itcanreflectthenaturalvirulentrateof leptespi