热原检测的三种方法在非肠道用制品检测中的适用性比较的研究.pdfVIP

热原检测的三种方法在非肠道用制品检测中的适用性比较研究 杜颖 蔡彤 刘倩 张横 贺庆 裴宇盛 张媛 高华 谭德讲* （中国食品药品检定研究院，药理室，北京 100050） 【摘要】目的：选用三种含不同类别热原的非肠道用制品对家兔热原检查法(RPT)、细菌内毒 素检查法(BET)和新的体外热原检查法(IPT)三种不同原理的热原检测方法进行比较研究，以期 评价它们在制品检测中的准确性、可靠性和适用范围，为今后制品选择适宜的检查方法提供 科学的依据，确保制品临床使用的安全性。方法：用三种热原检测方法分别对b 型流感嗜血 杆菌结合疫苗（Hib）、卡介菌多糖核酸注射液（BCG-PNA注射液）和红花注射液三种制品进 行检测，以药典规定的人用热原限量标准为判断依据，比较三种方法所测制品中致热物质含 量（相当于内毒素标准单位）之间的差异。结果：根据药典规定的临床人用热原限量标准， Hib应不高于50EU/ml，BCG-PNA 注射液应不高于50EU/ml，红花注射液应不高于2.5EU/ml。 检测结果显示，三种检查法检测Hib的结果均一致（为合格）[RPT法（＜50EU/ml）、BET法 （4.63EU/ml）和IPT 法（＜1EU/ml）]，但检测BCG-PNA 注射液[在RPT 法（＜50EU/ml） 和IPT 法（46.50EU/ml）的结果均为合格，但BET 法（4455.5EU/ml）的结果为不合格]和红 花注射液[RPT法（＞2.5EU/ml）的检测结果为不合格，而BET法（＜0.3EU/ml）和IPT法（＜ 0.9EU/ml）的结果均为合格]的结果却有所不同。结论：Hib 适用于三种检测方法，可考虑选 用IPT 法或BET 法替代RPT 法；BCG-PNA 注射液适用于RPT 法与IPT 法，而BET 法的检 测结果与RPT法和IPT法的不一致，可能是因该制品含有与内毒素结构类似的多糖结构，故 其不适用于BET法，所以今后可能只有考虑选用IPT 法替代RPT 法；红花注射液因BET 法 和IPT法的检测结果与RPT法（至今认为RPT法为金标准）不一致，又因其成分复杂、活性 作用广泛，故目前最好还是使用RPT法对其进行热原检测。本研究也证明，对于BET法和IPT 法的广泛应用还需要更多的研究与评价。 【关键词】热原；家兔热原检查法；细菌内毒素检查法；体外热原检查法；b型流感嗜血杆菌 结合疫苗（Hib）；卡介菌多糖核酸注射液（BCG-PNA注射液）；红花注射液 作者简介：杜颖（1977-），女，助理研究员，硕士，研究方向：实验动物与热原检测。E-mail： dy9630@ *通讯作者：谭德讲（1965-），男，主任药师，研究方向：药理学。Tel:+86-10E-mail: tandj@ 1 引言 热原对人体的危害，即热原反应已人所共知。临床上主要表现为发热、寒颤，恶心、呕 吐、头痛和腰、关节痛、肤色灰白、白细胞下降、血管通透性增强、严重者造成昏迷甚至休 [1,2] 克、死亡 。因此对体内非肠道用药制品的热原控制和检查是其能否在临床上安全使用的重 要保证。目前，各国药典收载的热原检测法包括家兔热原检查法(RPT 法)与细菌内毒素检查 法(BET法)。然而，近年来随着社会公众对动物福利的呼声越来越高，以及3R理论在实验动 物领域中的推广与渗透，为了减少动物的使用量，越来越多的研究者开始研究与建立体外热 原检测法。2009年，欧洲药典6.7收载了体外热原检查法，同年，美国FDA认可并接受了5 [3] 种体外热原检测方法(IPT法) 。 三种方法虽然检测的目的相同，即均是检测药品中的热原含量是否超标，但因检测原理 的不同，各自都存在着优点与不足。表1将三种方法的检测原理及优缺点进行了汇总。 从表1中可以清楚的了解到RPT法是根据哺乳动物的发热机理所进行的热原检测，其检 测范围包括内毒素在内的所有外源性致热物质。虽然目前各国药典均有收载，并认为其是检 测热原的“金标准”，但目前为止其对病毒的检测仍存在争议，现已知流感病毒不能用该法进 行检测。BET法是根据鲎试剂与内毒素产生凝集进行热原检测，虽可灵敏检测制品中的内毒 素含量，但其仅局限于检测内毒素这一种致热物质，而对其他致热物质如革兰氏阳性菌的脂 磷壁酸、抗原