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广西师范大学学报(自然科学版)
2003年10月 JOURNAl，OFGUANGXlNORMAl』UNlVER轧TY
蔬菜叶片中叶绿素a和叶绿素b的一阶
导数分光光度法同时测定
王尊本，王娴
005)
厦门大学教育部分析科学重点实验室，福建厦门361
叶绿素在植物的光合作用中起着重要的作用．通常可采用分光光度法“23或荧光法…测定叶绿素a
量““，但菜叶中共存的类胡萝h素对chlb的测定有干扰，需要进行较复杂的扣除处理．本文在此基础上
进行改进，选用更合适的波长进行测定，消除了类胡萝h素对chlb测定的干扰，使方法更加快速、简便．
1仪器与试剂
美国Beckman公司DU
司的纯品试剂配制，或自行用新鲜去脉菜叶经纸色谱分离提纯后稀释而得．采用分光光度法按以下公式计
A
A662—0．99 A
算chla和chlb的准确浓度：(1Al。(mg／I。)一9．786…C㈨(mg／I。)一21．43A。，一4．65662．式
中／l。和A。分别为溶液在644nm和662nm波长处测得的吸光度．
90％丙酮溶液和固体碳酸镁为分析纯试剂，水为二次去离子水．
2实验方法
取适量chla，chlb和类胡萝h素的标准溶液分别
…。
置于三个10mI．棕色容量瓶中，用90％丙酮溶液定
容．将三溶液先后倒人1cm光程的玻璃吸收池中，用妻…。。一一≈(，
90％丙酮溶液为参比，在600～700nm波长范围内以。 ／＼
、 ×
600
nm／min的扫描速度绘制它们的吸收光谱．以A2=
…
4nm将吸收光谱转换成一阶导数谱图(如图1)．
从图中可见，类胡萝h素在600～700rim波长范 ∥l
围内导数值均为零．在646nm处Chla有一定的导数
nixl处
值(负值)，而chlb的导数值为零．类似地，在635
Chlb有一定的导数值(负值)，而chla的导数值为零．
因此可实现chla和chlb两者的同时测定，又不受类胡
萝h素的干扰．
3工作曲线
取一系列不同浓度的chla和chlb的标准溶液，按上述方法分别求出它们在616nNl和635nm处的
21824d2；E
作者简介：王尊本(I940)，男．教授研究方向：分子吸收与发射分析电话：0592
com．
广西师范大学学报(自然科学版) 第21卷
3
H一为纵坐标作图，即可得到chla和chlb的工作曲线．其拟合方程分别为：H。I一0．251Cm。+o．01898
l
和，，b一一0．225C‰+0．066 60．
19，相关系数分别为0．99979和0．999
4样品分析
称取0．5g洁净的去脉菜叶，剪碎后置于研钵中，加入0．1g碳酸镁和3mI。90％丙酮溶液．研磨至浆
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