猪传染性胃肠炎病毒TaqMan荧光定量RT2PCR检测方法的建立.pdfVIP

中国畜牧兽医学 畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学 兽医免疫分 第七次研讨 会论文集 猪传染性胃肠炎病毒 Man 荧光定量 RT2PCR 检测方法的建立 1 1* 1 1 1 1，2 1，2 白兴华 ，冯 力 ，陈建飞 ，时洪艳 ，孙东波 ，吴波平 ，高秀春 ( 1. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室/ 猪传染病研究室， 黑龙江 哈尔滨 150001 ；2. 东北农业大学，黑龙江 哈尔滨 150030) 摘 要：根据猪传染性胃肠炎病毒和猪肌动蛋白的基因序列设计合成了引物和探针，通过对荧光定量 RT-PCR 反应条件的优化，建立了 Man 荧光定量RT2PCR 检 TGEV 的方法。同时对37 份现地病料进行检 并与常规RT-PCR 方法、TGEV 抗原快速检测试剂盒比较。结果,该方法的检 感性达到 15.3 拷贝/ 滋L ，且 3 对 具有很好的特异性和重复性，而常规RT2PCR 方法只能检测到 1.53 ×10 拷/ 滋L 。 37 份现地病料的检测结果 也表明该法(检出17 份) 比常规 RT2PCR 方法(检出12 份) 和TGEV 抗原快速检测试剂盒(免疫层析法，检出10 份) 的 感性高。 关键词：猪传染性胃肠炎病毒； Man 探针；荧光定量RT2PCR 猪传染性胃肠炎(Transmissible gast roenteritisof 检测方法。但是这些方法都不能满足特定要求。 swine ，TGE) 是由猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible 1995 年美国PE 公司成功研制了 Man 技术, gast roenteritis virus of swine ，TGEV) 引起的一种高 1996 年推出了首台荧光定量PCR 检测仪。荧光定 度接触传染性的肠道疾病,以引起1 周龄以下仔猪呕 量PCR 技术具有能定量、高 感性、高特异性、高 、 。 尤 吐 水样腹泻和高死亡率(通常 100 %)为 要特征 通量等优点，非常适用于病毒感染的检测， 其是 TGEV 属冠状病毒科冠状病毒属成员, 是单股正链 感染早期检测。本研究旨在应用 Man 探针建立 RNA 病毒,基因组全长28.6 kb ，共有7 个开放阅读框 一种 TGEV 的荧光定量 RT-PCR 检测方法，用于 [1 ，2] TGEV 的定量检测、表达差异及感染后病毒在体内 (ORF) ，其中编码核衣壳蛋白的ORF 6 高度保守 。 。 分布等研究。 目前TGEV 只有一个血清型 TGEV 自1945 年在美 、 、 国首次报道后,迅速在北美 欧洲 亚洲等地蔓延, 成为一种世界性的猪病,给养猪业