胶束毛细管电动色谱分离检测猪血清中的半胱氨酸.pdfVIP

2006年l1月 第四届海峡两岸分析化学学术会议论文集 湖北·武汉 胶束毛细管电动色谱分离检测猪血清中的半胱氨酸 蔡涯文，韩鹤友’，梁建功 (华中农业大学理学院，农业部食品安全评价重点开放实验室，武汉430070) 摘要：以纳米金胶束磷酸缓冲溶液作为电泳流动相，在15kV的工作电压下，采用毛细管电动 色谱有效分离出混合氨基酸中的半胱氨酸，据此建立了一种半胱氨酸分离分析新方法，并将该方 法成功用于猪血清中的半胱氨酸的分离，结果令人满意。 关键词：胶束电动毛细管电泳；纳米金；半胱氨酸；猪血清 1前言 近年来，纳米金作为一种新型标记试剂已经在生化领域引起了人们广泛关注11,21，然而， 其作为色谱流动相的研究很少见报道，尤其是将其作为胶束溶液分离氨基酸尚未见报道13,4]。本 文以纳米金(16 rim)胶束作为电泳流动相，成功分离了混合氨基酸中的半胱氨酸，并考察了电 压、缓冲溶液浓度、纳米金浓度和pH值的影响。在最佳条件下，对半胱氨酸分离检出限比无纳 米金胶束体系降低了12倍，并采用该方法成功分离了猪血清中的半胱氨酸(Cys)。 2实验部分 2．1仪器与试剂 本实验使用P／ACE SystemMDQ(Beckmanmodel)电泳仪，50}u11×60．2cm毛细管(有效 长度50cm，Beckman)。 (Pro)，组氨酸(His)标准品，AuCl3．HCl-4H20，柠檬酸钠。 所有试剂均为分析纯，购至上海试剂厂。实验所用水为Milli—Q超纯水。 2．2电泳条件 moU 流动相：磷酸缓冲溶液(pH7．0，1×10。2 L)，工作电压：15kV，毛细管柱温：25℃， 进样压力：1．0 s。 psi，进样时间：5 3结果与讨论 图l是加入纳米金前后七种标准氨基酸混合物的分离图谱。从图1可以看出，加入纳米金溶 胶后Cys的分离峰强度增强了12倍，说明以纳米金为胶束溶液的毛细管电动色谱分离方法可以 提高混合氨基酸中的Cys的检测灵敏度，这可能是由于Cys所带巯基与纳米金颗粒表面的相互 作用，使得纳米金胶束对巯基化合物有特异选择性。 将所建立的纳米金胶束缓冲体系用于分离检测实际样品猪血清中的Cys组分，检测得猪血清 中Cys的浓度为(5．23士0．939)x +通讯联系人 18l 2006年11月 第四届海峡两岸分析化学学术会议论文集 湖北·武汉 7．06％和O．267％。并用标准加入法对其进一步验证。结果令人满意。 基于纳米金与巯基的作用机理，此检测方法的建立不仅用于半胱氨酸的分离检测，还可被用 于其它小分子及蛋白质、核酸等生物大分子的分析检测。 ofthemixtureaminoacids Aucolloidinthemobile Fig．ISeparation before(a)andafter(b)added phase WaS 0’2mol／L buffer 7．O、was 15kV, buffer,1×1 solution(pHused．Appliedvoltage Running phosphate and at1．0 for5S WaSused．Themixtureaminoacidswere： pressureinjectionpsi 0一mol／L Cys，Met,Ala,Thr