MiR-214表达载体的构建及其对肝癌细胞Hep3B增殖的影响.pdfVIP

山西医科大学学报，2015年3月，第 鲞 箜 ·193 · MiR-214表达载体的构建及其对肝癌细胞 Hep3B增殖的影响 杨 阳 ，常素娥 ，胡丽丽。，高 岭 ，何 康 ，汪鲁敏 ，童东东 ，郭 波 ，蔡东晖 ，宋土生 ，黄 辰 ，。 (西安交通大学医学院遗传学与分子生物学系，西安 710061；山西中医学院基础医学院；西安交通大学医学院心血管研 究中心；通讯作者，E-mail：hchen@mail．xjtu．edu．cn) 摘要 ： 目的 构建pcDNA 6．2-GW／EmGFP．miR一214表达载体，并检测其对肝癌Hep3B细胞增殖的影响。 方法 以人的 基因组 DNA为模板，利用PCR扩增 miR-214前体序列，构建pcDNA 6．2-GW／EmGFP-miR-214表达载体，序列 比对及实时定 量 PCR验证 miR-214表达载体是否构建成功 ，MTY实验检测miR-214对肝癌 Hep3B细胞增殖的影响。 结果 序列 比对及 实时定量PCR验证miR-214表达载体构建成功。将成功构建的miR-214表达载体导入肝癌细胞Hep3B，发现其对细胞增殖具 有抑制作用。 结论 本研究成功构建 miR-214表达载体并证明miR-214可能参与肝癌发展的过程。 关键词：miR-214； 肝癌； 分子克隆技术 中图分类号： 耵35．7 文献标志码 ： A 文章编号： 1007—6611(2015)03—0193—05 DOI：10．13753／j．issn．1007—6611．20l5．O3．001 Constructionofm iR-214expressionvectoranditseffecton theproliferationofhepatocellularcarcinomacellHep3B YANG Yang ，CHANG Su～e ，HU Lili，GAO Ling ，HE Kang ，WANG Lumin。，TONG Dongdong ，GUO Bo ，CAIDonghui， SONGTusheng．HUANGChen”(DepartmentofGenetwsandMolecularBiology，Xi’anJiaotongUniversityCollegeofMedicine， Xi’an710061．China；0BasicMedicalCozz ，ShanxiUniversityofTraditionalChineseMedciine；CardiovascularResearchCenter，Xi’ anJiaotongUniversityCollegeofMedicine； Correspondingauthor，E—mail：hchen@ma il．xjtu．edu．cn) Abstract： 0bjective ToconstructthemiR-214expressionvectorandexploreitseffecton山eproliferationofhepatocellularcarcino． macellHep3B． Methods Theprecursorofhumna miR-214genewasamplifiedbypolymerasechainreaction(PCR)fromthehuman genomicDNA．ThemiR-214expressionvectorpcDNA 6．2．GW ／EmGFP．miR-214wasconstructedandthenverifiedbysequencea— lignmentandrealtimePCR． Results ThepcDNA 6．2．GW ／EmGFP—miR-214expressionvectorwassuccessfullyconsturctednad confirmedbytheresultsofsequencealignmentnad realtimePCR．MTrassayshowedthatmiR-214 inhibited the proliferationof Hep3Bceils． Conclusion ThemiR-214mightbeinvolvedinthedevelopmentofhepatocellularcarcinoma． Keywords： miR-214： hepatocellularcarcinoma； molecularcloningtechnique 肝细胞癌 (hepatocellularc