CRISPR-Cas9技术新应用.pdfVIP

1期 中 国农 业 科 技 导 报 181 DNA片段的合成，鉴定了负责合成 了起始核糖体 的织特异性分析。 泛素化的全新功能 工作的聚合酶。基因组 DNA的双向 QTI—seq、RNA—seq和 Ribo—seq相结 复制 ，需要后随链 以一系列冈崎片 合 ，能为人们展示在差异性生长条 泛素化是一种广为人知的蛋 白 段的形式合成，这些片段经过加工 件下的核糖体翻译全景图。QT1一seq 修饰，这种修饰能够改变蛋白结构 会形成连续的DNA链。研究显示， 是一种能在细胞和组织中定量研究 或在细胞内传递信号。我们发现，一 冈崎片段的5’端存在更高水平的核 起始核糖体的技术。该技术将帮助 种特殊的泛素化可以刺激蛋 白合 苷酸替换，是基 因组 DNA突变的重 我们从整体上理解翻译起始的基础 成，帮助细胞应对压力条件。蛋白合 要来源。进一步研究表明，这些容易 机制。 成对于细胞生存是至关重要的。 出错的片段来 自于 DNA聚合酶 ， (Nat．Methods，2015，DOI：10． 工业污染、二手烟、太阳辐射 、放 大约占成熟基因组的1．5％。研究人 1038／nmeth．3208) 射性辐射等有害环境 ，会损害细胞 员指 出，复制后的转录因子结合会 的重要成分 ，导致细胞发生氧化应 促进这些突变的生成。正因如此 ，突 CRISPR—Cas9技术新应用 激 ，触发高度复杂的防御应答 。细胞 变往往发生在决定基因何时开／关 通过降解去除发生功能异常 的蛋 的调控区域。 研究哺乳动物基因功能的经典 白，这一过程受到泛素化的控制。泛 发生在关键区域的错误会改变 方法是用遗传学手段敲除基 因或用 素化存在于几乎所有生物 的细胞 或摧毁调控开关，进而引起遗传学 RNAi删除mRNA，从而去除感兴趣 中，目前人们已经 比较了解泛素化 疾病、改变对 常见病 的易感程度。 的蛋白，来诱导一种表型。为了确认 介导的蛋 白降解 ，必威体育精装版研究为人们 emRiboSeq能帮助人们鉴定这样的 所靶定 的基因是否为诱变基因，需 展现了泛素化的全新功能，这种功 致病突变，尤其是在神秘的基 因组 要修复相同基 因一个变异体的异位 能完全独立于它在蛋白降解中的作 非编码区域。 表达所引起 的功能表型缺失。遗憾 用。研究显示 ，一种特殊的泛素化 (Nature，2015，DOI：10．1038／ 的是 ，组成型基因敲除可激活一种 (K63)能够修饰并稳定核糖体 ，而核 nature14183) 显著损害表 型和基 因功能 的代偿 糖体是蛋 白合成的发动机。研究人 机制。 员发现，阻止酵母建立 K63泛素链， 一 种定量分析翻译起始的 然而 ，修复基因缺失或损耗，同 会使蛋白产量大幅削减，结果细胞 新测序技术 样充满了潜在危险。为了弥补这一 对压力条件高度敏感。研究人员是 差距 ，研究人员开发 出一种高效的 在酵母 中研究 K63泛素链 的，不过 细胞有一套精妙 的机制，根据 CRISPR／Cas9和 rAAV靶 向基 因重 这种泛素化也出现在小鼠的神经元。 环境变化调整蛋 白质