吲哚乙酸氧化酶活性的测定.pptVIP

* * P144 熟悉运用比色法测定吲哚乙酸氧化酶活力的方法，并掌握测定酶活力的基本要求。 实验目的 实验原理 吲哚乙酸在吲哚乙酸氧化酶的作用下，被氧化破坏失去活力。植物体内吲哚乙酸氧化酶活力的大小，对调节体内吲哚乙酸的水平起着重要的作用，从而影响植物的生长。 酶活力的大小可以其破坏吲哚乙酸的速度表示。吲哚乙酸的含量可用比色法测定。 IAA +FeCl3 → 红色螯合物 绿豆芽的下胚轴 。 实验材料 上胚轴:子叶到第1片真叶之间的部分 下胚轴:子叶与根之间的一部分 下胚轴 取材部位 ②处理：在试管中加入：MnCl2 1ml +2，4-二氯酚1ml + IAA 2 ml+酶液1 ml+磷酸缓冲液5ml 对照：在试管中加入：MnCl2 1 ml +2,4-二氯酚1ml + IAA 2 ml+ 磷酸缓冲液6ml ①称取1g下胚轴，置于研钵中，加入预冷的磷酸缓冲液(pH=6.1)1ml，研磨成匀浆，再用9ml分2次冲洗，总体积为10ml。离心4000rpm 10min，所得的上清夜即为粗酶液。 IAA含量的测定 方法步骤 标准曲线的绘制。 IAA氧化酶需要两个辅助因子： 一元酚和二价离子 Mn 计算 时间(h) IAA氧化酶活力 = (μg·IAA/h·ml) 对照—处理(μg/ml) × 10 保温：30℃温箱中30min； 显色：三支试管中分别加入处理液、对照液、蒸馏水各2ml后，再分别加入试剂A8ml，摇匀，40℃黑暗处30min(15-20min)； 用分光光度计在530nm波长处测A值； 查标准曲线； 简述IAA 氧化酶活力测定的原理。 制备酶液时，为何加入pH 6.1 的磷酸缓冲液。 酶促反应时，为何要加入MnCl2和2，4-二氯酚。 比色时，为何要选在530nm波长处？ 现有黄豆芽、绿豆芽两种材料，测定黄豆芽的吸光度值为A1，绿豆芽的吸光度值为A2，且A1A2，试比较这两种材料下胚轴中哪个IAA氧化酶活力大，为什么？ 实　验 （设计性实验） 结果总结 切口及与培养基接触处生长愈伤，黄白色，湿润 0 100 16 12*3 MS+2,4-D1.0 +6-BA1.0 切口及与培养基接触处生长愈伤，黄色透明，较湿润 0 100 17 12*3 MS+2,4-D1.0 +6-BA0.4 切口处较多出愈，黄色颗粒状，偶见灰白色愈伤 7.69 97.43 18 13*3 MS+2,4-D1.0 愈伤生长 情况 污染率（%） 出愈率（%） 最早出愈 时间 （d） 接种数 (瓶*片） 培养基 不同培养基对怀地黄愈伤组织生长情况的影响 *