兔颌面部鳞癌细胞系建立及其生物学特性的研究.pdfVIP

中文摘要 研究目的：旨在建立纯种新西兰白兔颌面部鳞癌细胞系，同时对其 进行细胞形态、同种原位成瘤、异体裸鼠成瘤、生长周期、生长曲线、 核型分析等一系列生物学特性检测，并与其来源组织进行比较。 研究方法： ①原代培养a贴块法以兔舌癌原发病灶为培养材料， 在无菌条件下剪成1mm 3大小组织块；b消化法将兔舌癌组织经0．25％ 胰蛋白酶、螯合剂(EDTA)作用分散成单细胞；c癌腹水培养法建立 兔癌性腹水模型，腹水经密度梯度离心法收集癌细胞：以上原代培养材 料均加20％RPMll 640兔血清培养基中，置5％C02、37℃培养箱内培养； ②首次传代后，用反复贴壁和胰酶消化去除成纤维细胞；③相差显微 镜、微分干涉显微镜、HE染色、透射电镜、扫描电镜观察培养细胞形态、 核浆比、细胞骨架排列状态、桥粒连接、张力原纤维等；④检测增殖特 性 流式细胞仪检测细胞周期；计数法描绘生长曲线；计算倍增时间； 计算细胞贴壁率；⑤检测核型特点，包括染色体数量、标记染色体的有 无、带型；⑥异体成瘤、同体原位成瘤以1×106、5×106细胞数量 分别行裸鼠异体、兔同体原位接种，观察成瘤能力：⑦ 组织来源鉴定 免疫组织化学法检测培养细胞的角蛋白染色情况，以确定组织来源。 研究结果：建立一株兔颌面部鳞癌无限细胞系，并命名为NZW～ 0483l。现已稳定传至60余代。生物学检测结果：肿瘤细胞呈多角形、 短梭形；电镜下细胞内可见张力纤维、细胞间可见桥粒：细胞角蛋白阳 性；生长曲线呈现3个时相，即停滞期、对数生长期和平台期：细胞倍 增时间为34．5h；细胞周期测Gl期为62．94％，G2期为19．08％，S期为 17．99％；平板集落形成率为62．38％；染色体为亚四倍体核型，染色体数 植成瘤率100％；无支原体污染。 研究结论： ①NZW．04831为一株恶性度高的兔颌面部鳞癌细胞系， 保留了其来源细胞的生物学特性，可作为颌面部鳞癌研究的实验模型； ②动物模型的病理类型、生物学行为与人口腔颌面部鳞癌相似，可发生 区域性淋巴结转移及远隔器官肺等转移。 关键词：新西兰白兔，颌面部鳞状细胞癌，动物模型，细胞系 Abstract establishanoralandmaxillofacialcell Objective：To squamous rabbitsand its carcinomacelllineof New—Zealandwhite analyze purebred ascell insitu characteristics，such biological inrabbitsandnude andsoon， curve，karyotype mice，cellcycle，growth withthe tissues． comparingoriginal Method culture：A．Thewas fromthe s：①primary specimenacquired cutted cell inthe ofarabbitandwas carcinoma