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一、培养基种类 1．基础培养基：含有基础生长所需的基本营养成分，最常用的是肉浸液，称肉汤，主要成分含牛肉浸液和蛋白胨。基础培养基广泛用于增菌、检验，也是制备其他培养基的基础成分。 2．营养培养基：在基础培养基中可加入葡萄糖、血液、生长因子等特殊成分，供营养要求较高的细菌和须要特殊生长因子的细菌生长。最常用的是血琼脂平板、巧克力血平板等。 3．鉴别培养基：利用细菌分解糖类和蛋白质能力及代谢产物的不同，在培养基中加入特定的作用底物和指示剂，观察细菌生长过程中分解底物所释放的不同产物，通过指示剂的反应不同来鉴别细菌。如糖发酵培养基。 4．选择培养基：在培养基中加入抑制剂，去除抑制标本中的杂菌生长，有助于对所选择细菌种类的生长。 5．特殊培养基：包括厌氧培养基和细菌L型培养基等。厌氧培养基是培养专性厌氧菌的培养基，除含营养成分外，还加入还原剂以降低培养基的氧化还原电势。细菌L型培养基是针对细胞壁缺损的细菌L型，由于胞内渗透压较高，故培养基必须采用高渗低琼脂培养基。 二、分离培养基的选择 1．血平板：适于各类细菌的生长，一般细菌检验标本的分离，都应接种此平板。 2．巧克力血平板：其中含有V和X因子，适于接种疑有嗜血杆菌、奈瑟菌等的标本。 3．中国蓝平板或伊红美蓝平板：可抑制革兰阳性细菌，有选择地促进G-菌生长，是较好的弱选择性培养基。发酵型革兰阴性菌因分解乳酸糖能力不同，在此平板上菌落颜色不同，便于鉴别菌种。 4．麦康凯平板：具中等强度选择性，抑菌力略强，有较少革兰阴性菌不生长。在该平板上能否生长，是非发酵菌鉴定的依据。 5．SS琼脂：有较强的抑菌力，用于志贺菌和沙门菌的分离。 6．碱性琼脂：用于从粪便中分离霍乱弧菌及其它弧菌。 7．血液增菌培养基：用于从血液、骨髓中分离常见病原菌。 8．营养肉汤：用于标本及各类细菌的增菌。 根据标本来源和可能存在的病原菌，确定选用各种分离培养基。如痰标本一般选用血平板、中国蓝、麦康凯、巧克力平板做分离。其中血平板用于肺炎链球菌、白喉棒状杆菌等的分离；中国蓝/麦康凯用于筛选革兰阴性杆菌；而含杆菌肽的巧克力平板用于筛选嗜血杆菌等，以期提高细菌检验的准确性。 三、 要球菌种有金黄色葡萄球菌，表皮葡萄球菌，头状葡萄球菌，人葡萄球菌和腐生葡萄球菌。 革兰阳性菌：葡萄球菌，链球菌，肺炎链球菌 革兰阴性菌：脑膜炎奈瑟菌，淋病奈瑟菌 球菌呈球形：无鞭毛，无芽胞。 葡萄球菌属 生物学特征（掌握） 形态与结构： 球形或椭圆形，典型排列呈葡萄串状，在脓汁、肉浸液培养基中，可见单个，成对或短链排列。 无鞭毛，无芽胞，有些细菌能形成荚膜。 易被常用的碱性染料着色，革兰染色为阳性。 培养特性 需氧或兼性厌氧，营养要求不高，通常在肉浸液及肉浸液琼脂或加入血液的培养基上生长良好。最适pH为7.4，最适温度为35-37℃。 在普通琼脂平板：经35℃24-48小时培养，可形成不透明的圆形、凸起菌落，表面光滑，可呈不同颜色（金黄色、白色、柠檬色等脂溶性色素）。 在血琼脂平板：几乎所有的葡萄球菌可产生透明的α、β、γ和δ溶血环。 在液体培养基（普通肉浸液）中生长迅速呈均匀混浊状。 生化反应 本属菌触酶试验阳性，对糖的发酵反应不规则，多数能分解葡萄糖、麦芽糖及蔗糖，产酸不产气。多数致病性葡萄球菌能分解甘露醇产酸、液化明胶和产生血浆凝固酶。 抗原 葡萄球菌水解后，用沉淀法可获得两种抗原，即蛋白抗原和多糖抗原。 （1）蛋白抗原：是完全抗原，具有种、属特异性，而无型特异性。存在于葡萄球菌的表面，结合在细胞壁的粘肽部分，具有抗吞噬作用，称为葡萄球菌A蛋白。 （2）多糖抗原：是半抗原，具有型特异性，有三种：A型多糖抗原；B型多糖抗原；C型多糖抗原。 分类 1965年，国际葡萄球菌和微球菌分类委员会将葡萄球菌分为凝固酶阳性葡萄球菌与凝固酶阴性葡萄球菌。 凝固酶阳性葡萄球菌：包括金黄色凝固酶阳性葡萄球菌与凝固酶阴性葡萄球菌、中间型葡萄球菌和家蓄葡萄球菌。 凝固酶阴性葡萄球菌：包括表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌。 染色标本检查（熟练掌握） 细菌标本经染色后，由于细菌与周围环境间在颜色上形成鲜明对比，故在普通光学显微镜下可清楚地观察到细菌的形态特征（如细菌的大小、形状、排列等）和某些特殊结构（如荚膜、鞭毛、芽孢等），并可根据染色反应性对细菌加以分类鉴定。 常用染料（熟练掌握） 根据助色基解离后的带电情况，可将染料分为碱性和酸性两大类。此外，还有复合染料。 1、碱性燃料 电离后显色离子带正电荷，易与带负电荷的被染物结合。由于细菌的等电点在pH2-5之间，在碱性、中性、弱酸性的环境中细菌均带负电荷，易与带正电荷的染料结合而着色。常用的染料有碱性复红、结晶紫、亚甲兰等。 2、酸性染料 电离后显色离子带负电荷，易与带正电荷的被染物结合。一般情况下细菌都带有负电荷，不易着色