新城疫病毒融合蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立.pdfVIP

中国兽 医科技 第 34卷 第 4期 2004年 3 新城疫病毒融合蛋 白抗体 间接 ELISA 检测方法的建立 韦栋平 ，徐忠林，张如宽，刘秀梵 (扬州大学 农业部畜禽传染病学重点开放实验室 ，江苏 扬州 225009) 摘要 ：用新城疫病毒 (NDV)F48E8株作为包被抗原 ，建立 了检测 由鸡痘病毒栽体介导表达的 NDV融合蛋 白(F)抗体的间接 EIISA 方法。通过对 20份 阳性血清的 P／N值与 EIISA抗体效价 (ET)的 自然对数值 (1nET)的线性回归分析 ，获得 了回归方程 lnET 一0．201×P／N+4．632。应用 该EIISA方法对表达 NDVF基因的重组鸡痘病毒免疫鸡群进行 了血清抗体检测 ，结果表 明，血 清的EIISA抗体效价与相应血清 中和试验的抗体效价 高度相关。攻毒保护试验 的结果显示， EIISA抗体效价与机体的保护力表现一定程度的相关性。 关键词 ：新城疫病毒 ；融合蛋 白；间接 EIISA；抗体效价 中图分类号 ：S852．659．5 文献标识码：A 文章编号 ：1000—6419(2004)04—0003—06 新城疫 (Newcastledisease，ND)是 由副黏病毒 断能够标准化，且具有高度的特异性和敏感性 ，因此 科 的新 城疫病毒 (Newcastlediseasevirus，NDV) 更适用于F蛋 白ND基因工程疫苗免疫鸡群的免疫 引起的一种烈性家禽传染病 ，是危害我 国畜牧业最 监测 和免疫 效果评 价。本研 究 旨在 以我 国 NDV 为严重的四大疫病之一。参与构成 NDV表面囊膜 F48E8株作为包被抗原 ，建立一种能够快速和特异 的融合蛋 白(fusionprotein，F)是重要的宿主保护 地检测针对 F蛋白抗体的间接 EIISA方法，并应用 性抗原之一一。十几年来 ，国内外多个实验室利用 于重组鸡痘病毒免疫鸡群的抗体水平监测 。 融合蛋 白(F)基 因作为 目的基 因。对 ND基 因工程 l 材料与方法 疫苗包括 DNA 疫苗、亚单位疫苗和病毒活载体疫 苗的研制进行了探索 。扬州大学农业部畜禽传染病 1．1 病毒及试验用鸡 学重点开放实验室应用 自主开发的鸡痘病毒表达系 NDVF48E8株和鸡痘病毒 282E4疫苗株 (wt— 统相继构建 了一系列表达 NDVF48E8株 F基 因以 FPV)购 自中国兽 医药 品监 察所 ；分 别表 达 NDV 及联合表达 F基 因和其他病毒抗原基因的重组 鸡 F48E8株 F 基 因 的重 组 鸡 痘 病 毒 rFPV—F一1、 痘病毒一，实验室免疫效力试验证实其保护效力与 rFPV—F一2和共表达 NDVF48E8株 F基因和 H9亚 常规疫苗相当，极具实用价值 。目前 国际上对免疫 型禽流感病毒血凝素 (HA)基 因的重组鸡痘病毒 鸡所产生的针对 F蛋 白的抗体检测主要采用中和 (rFPV—F—HA)由笔者所在实验室构建；SPF种蛋购 试验 和 EIISA 包 括 间 接 EIISA 和竞 争 自山东省家禽研究所 ；5 日龄 SPF鸡 由本实验室孵 EI1SA 。虽然中和试验检测抗体具有 良好 的特 化和饲养。 异性 ，但该方法需要较为严格的试验条件 ，因此不适 1．2 阳性、阴性血清 用于大批量血清样 品的检测。与之相 比较，EIISA 阳性 血 清：用 吴 艳 涛等 构 建 的表 达 NDV 则适宜于大规模检测，方便易行，操作过程及结果判 F48E8株 F基 因的重组鸡痘病毒接