微生物限度检查方法和验证课件.pptVIP

Reported by Wang Yanzhong 2010.12 Global Manufacturing and Supply 在验证时，应对每一试验菌逐一验证。 通常微生物限度检查法验证包括： 1. 细菌、霉菌及酵母菌数计数方法验证 定量——回收率测定实验 2. 控制菌检查方法的验证。 定性——能否生长、专属性实验 Reported by Wang Yanzhong 2010.12 Global Manufacturing and Supply 微生物限度检查方法： 通常微生物限度检查有两种方法即： 1. 平皿法 2. 薄膜过滤法。 两种方法的优缺点： 平皿法： 若样品本身的混浊，会干扰计数结果； 由于接种量限制，试验灵敏度受局限； 操作简便，设备要求低。 Reported by Wang Yanzhong 2010.12 Global Manufacturing and Supply 微生物限度检查方法： 两种方法的优缺点 薄膜过滤法： 操作复杂，设备要求高； 不适用于无法溶解的样品； 大体积检验量，检验灵敏度不受局限； 样品中的抑菌因素可被滤除； 中和试剂可应用在淋洗液中，如：?-内酰胺酶； 分散剂可作为溶剂，如十四烷酸异丙酯。 Reported by Wang Yanzhong 2010.12 Global Manufacturing and Supply 计数方法的验证： 当建立产品的微生物限度检查法时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证，以确认所采用的方法适合于该产品的细菌、霉菌及酵母菌数的测定。 供试液的制备： 通常供试液的制备分为： 1.1 液体供试品； 1.2 固体、半固体或粘稠性供试品； Reported by Wang Yanzhong 2010.12 Global Manufacturing and Supply 计数方法的验证： 供试液的制备： 1.3 需用特殊方法制备供试液的供试品： 1.3.1 非水溶性供试品； 1.3.2 膜剂供试品； 1.3.3 肠溶及结肠溶制剂供试品； 1.3.4 气雾剂、喷雾剂供试品； 1.3.5 贴剂供试品； Reported by Wang Yanzhong 2010.12 Global Manufacturing and Supply 计数方法的验证： 供试液的制备： 1.4 具有抑菌活性的供试品： 通常采用下列方法进行处理，以消除供试液的抑菌活性。 1.4.1 培养基稀释法； 取规定量的供试液至较大量的培养基中，使单位体积内的供试品含量减少，至不含抑菌作用。测定细菌、霉菌和酵母菌的菌数时，取同稀释级的供试液2ml，每毫升供试液可等量分注多个平皿培养计数。每毫升供试液所注的平皿中生长的菌落数之和即为1ml的菌落数。控制菌检查时可加大培养基的用量。 Reported by Wang Yanzhong 2010.12 Global Manufacturing and Supply 计数方法的验证： 供试液的制备： 1.4 具有抑菌活性的供试品： 1.4.2 离心沉淀法； 取一定量的供试液，500rpm离心3分钟，取全部上清夜混合。该方法仅适用于细菌计数或控制菌（细菌）检查。该方法只用于去除供试液中的沉淀物。采用该方法时，供试液中的样品颗粒大小、粘稠度及污染的微生物大小等直接影响着样品中微生物的回收，易造成检验结果不能真实反应供试品的污染情况。因此，供试液制备时尽量避免使用该方法，更不易采用高速离心沉降集菌。 Reported by Wang Yanzhong 2010.12 Global Manufacturing and Supply 计数方法的验证： 供试液的制备： 1.4 具有抑菌活性的供试品： 1.4.2 离心沉淀法； 例如：小儿惊风散。本法操作较烦琐，药品中污染的微生物有一定的损失。 1.4.3 薄膜过滤法； 通常薄膜孔径应不大于0.45um，直径一般为50mm，若采用其他直径的滤膜，冲洗量应进行相应的调整。滤器和滤膜在使用前采用适宜的方法进行灭菌。使用 Reported by Wang Yanzhong 2010.12 Global Manufacturing and Supply 计数方法的验证： 供试液的制备： 1.4 具有抑菌活性的供试品： 时应保证滤膜的在过滤前后的完整性。水溶性供试液过滤前先将少量的冲洗液过滤以润湿滤膜。油类供试液其滤膜和滤器在使用前应充分干燥。供试液经过滤膜过滤后，若需要用冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量为100ml。总冲洗量不得超过1000ml.