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第39卷 分析化学(FENXlHuAxuE)研究报告 第1期 ChineseJouma】Of 45～50 2011年1月 AnalyticalChemistry 离子对反相高效液相色谱法同时测定大鼠血浆和红细胞中 外源性磷酸肌酸及其代谢产物和相关三磷酸腺苷 邹玲莉 李秋莎 韩国柱‘ 吕莉 (大连医科大学临床药理教研室，大连116044) 摘 要 mm×4．6mm， 及其代谢产物肌酸(Cr)以及相关三磷酸腺苷(ATP)浓度的方法。采用心omasil-c。。色谱柱(250 5 3．O)；流动相B：O．2％KH2Po。+O．08％ pm)，流动相A：O．2％KH2P04+O．08％四丁基硫酸氢铵混合溶液(pH 四丁基硫酸氧铵混合溶液(以lmo儿Na0H调至pH7．5)；流动相c：甲醇。梯度洗脱，同时改变流速和检测波 长。血浆及RBc样品以HclO。沉淀蛋白予以净化。选用甲氧苄啶(TMP)为内标，以峰面积比内标法进行定 及TMP达基线分离，不受基质干扰，PCr在10～7500mg／L(血浆)、10～2500mg／L(RBc)．cr和ATP在10～ 1500 mg／L(血浆)、10～750 度(RsD)均小于lO％；回收宰均大于92％。采用本方法测定了静脉和口服给药Pcr后大鼠血浆和I啦c中 3种分析物浓度，结果满意。 关键词 离子对高效液相色谱；磷酸肌酸；肌酸：i磷酸腺苷；血浆；红细胞；药物代谢动力学 1 引 言 合成，在体内能量代谢中发挥重要作用。外源性Pcr可穿透缺血细胞直接供能，从而产生心肌保护作用 和运动强度耐力增强作用11~31。Pcr是一种高效低毒的心肌保护药，临床用于治疗心梗、心衰以及心脏 手术时停搏液中附加成分f4J。此外，Pcr还是不违反兴奋剂规则的力量和速度运动比赛项目的首选运动 补剂。 尽管Pcr已有大量非临床和临床药理研究，但其药代动力学研究却较少【“4’5】，且均采用分光光度法 和化学发光法等非特异方法检测血浆中的PCr，这些测定方法准确性有限。近年研究发现，Pcr的代谢 产物肌酸(creatineCr)具有较好的生理和药理活性，Pcr在体内代谢转化为cr的动力学过程的研究迄 今处于空白状态。本研究组的前期丁作发现，静脉注射PCr后，血液流变性能明显改善，全血粘度、血浆 的再合成，导致RBc中ATP水平升高有关。 Cr以及ATP浓度的方法，以基线扣除法(Baseline 关ATP的浓度，为PCr及其代谢处置的研究提供了生物分析方法。 2 实验部分 2．1仪器、试剂及材料 1loo高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)，包括四元泵、在线脱气装置、低温自动进样器、紫外检测 20lO 04—30收稿；20lo107一12接受 ‘ E+mail：hgzhx2236@sina．com 万方数据 46 分析化学 第39卷 仪器有限公司)。 药物PCr(注射用粉针剂：内含磷酸肌酸二钠盐四水合物，按无水物计含量为磷酸肌酸钠lg／支，哈 尔滨博莱制药有限公司惠赠，批号070823，纯度97％)；PCr对照品(磷酸肌酸二钠盐四水合物，德国 硫酸氢铵(TetrabutyIammoniumhydrogen KH：PO。，NaOH，HclO。，K：CO，等试剂均为分析纯。 健康SD大鼠，体重180～230 g，由大连医科大学动物实验中心提供，动物合格证号：scxK(辽) 2008—0002。 2．2 实验方法 2．2．1 mm×4．6mm，5 色谱条件 分析柱为Kroma