在线免疫亲和净化-液相色谱-串联质谱快速测定中草药及中成药中10种真菌毒素.pdfVIP

第39卷 分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告 第9期 2011年9月 ChineseJournalof 1341～1346 AnalyticalChemistry DOI：10．3724／SP．J．1096．2011．01341 在线免疫亲和净化一液相色谱一串联质谱快速测定 中草药及中成药中10种真菌毒素 赵孔祥+ 葛宝坤 陈旭艳 许泓 (天津出入境检验检疫局，天津300461) 摘 要将复合毒素免疫亲和柱的柱填料填充至不锈钢柱(35mill×4．6mm)，制成可重复使用的在线免疫亲 和净化柱。在线净化过程的上样溶剂为磷酸盐缓冲液(PBS，pH7．4)，清洗溶剂为水，转移溶剂为乙腈一水(1：l， y／y)。采用PBS／甲醇溶液提取样品中真菌毒素，提取液直接进行在线免疫亲和净化一液相色谱一质谱／质谱分 析，本方法可同时测定中草药及中成药中10种真菌毒素(伏马毒素B，、伏马毒素B：、T-2毒素、HT-2毒素、赭 曲霉毒素A(OTA)、玉米赤霉烯酮、口-玉米赤霉醇、p玉米赤霉醇、r玉米赤霉烯醇和p玉米赤霉烯醇)。本方法 的定量限(LOQ)为l～5Itg／kg，各基质在3个水平添加回收率(行一6)为62．3％～107．1％；相对标准偏差(RSD) 为2．1％～15．O％。 关键词在线免疫亲和净化；中草药；中成药；液相色谱一串联质谱；真菌毒素 引 言 近年来，中药中存在的真菌毒素备受关注【1】。药用植物采集后如干燥不及时、贮存不当及制备与加 工过程中处理不善，均可能污染各种真菌，并产生真菌毒素Ⅲ。在目前已发现的300多种真菌毒素中， q与人体 脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalen01)、T-2毒素(T-2toxin)、杂色曲霉素(Sterigmatocystin)等n 健康安全相关。 检测真菌毒素的方法有生物鉴定法、化学分析法、仪器分析法和免疫分析法等垆】。近年来，抗原抗 体特异性结合的免疫亲和层析技术，在真菌毒素及药物残留的前处理净化领域得到了广泛应甩删。 免疫亲和层析联用技术，也称在线(On-line)免疫亲和色谱，通过柱切换技术将免疫亲和净化柱串 层析一液质联用法检测蓝藻中的微囊藻毒素。Moretti等p1将免疫亲和柱直接串联到分析柱上，测定了牛 了在线拟除虫菊酯类杀虫剂的免疫亲和柱，实现复杂样品中此类化合物的高效、快速检测。本研究采用 制备的在线免疫亲和净化柱，实现了中草药及中成药中的赭曲霉毒素A等10种真菌毒素的在线净化一 液相色谱一串联质谱测定。本方法使用了高选择性的免疫亲和净化技术，降低了净化成本。 2 实验部分 2．1仪器与试剂 Ultra AM三重四极质谱仪、Turboflow在线液相色谱净化系统(两台Transcend600泵 TSQQuantum 及CTC多功能进样器)，配有AriaOS及Xcalibur操作软件(美国ThermoFisher公司)；振荡器(日本 素免疫亲和柱(myc06inl，美国Vicam公司)。 甲醇、乙腈和甲酸(色谱纯，美国Dikma公司)；醋酸铵(色谱纯，天津光复精细化工研究所)；NaCl，