香蕉穿孔线虫双重PCR快速检测技术研究.pdfVIP

维普资讯 植物病理学报 ACTAPHYTOPATHOLOGICASINICA 37(5)：472-478(2007) 香蕉穿孔线虫双重 PCR快速检测技术研究 葛建军 ，曹爱新 ，周国梁2，赵国柱。，谢丙炎4 (中国检验检疫科学研究院动植物检疫研究所，北京 100029；。上海出入境检验检疫局，上海 200135； 。北京林业大学生命科学与技术学院，北京 100083；中国农业科学研究院蔬菜研究所，北京 100081) 摘要：香蕉穿孔线虫(Radopholussimilis)是国际上公认的植物检疫性有害生物之一，是热带地区果树上最重要的线虫。通 过设计的属水平上的特异性引物Rl、R2(R1／2)和种水平上的特异性引物RS1、RS2(RS1／2)进行双重 PCR扩增香蕉穿孔 线虫，可扩增出长度为362和291bp的2个特异性片段谱带。同时分别对检测体系中反应参数进行优化，最佳延伸温度为 51．4℃，引物R1／2与RS1／2最佳浓度配比为0．2i~mol·L一／1．2i~mol·L～，并测试检测引物的灵敏度，能进行有效检测 的最低起始核酸量为 100Pg；同时，也能对单条线虫进行检测以及样品中线虫的检测。专化性测试证明，2对引物能有效 地进行香蕉穿孔线虫的快速分子诊断。 关键词：香蕉穿孔线虫；分子检测；双重 PCR DevelopmentofduplexPCRassayfordetectionofburrowingnematode，Radopho— lussimilis GEJian-jun，CAO Ai—xin，ZHOU Guo—liang，ZHAO Guo—zhu。，XIEBing．yan (InstituteofAnimalandPlantQuarantine，ChineseAcademyofInspectionnadQuranatine，Beijing100029，China；Shnaghai Entry—ExitInspectionnadQuranatineBureau，Shnaghai200135，China；CollegeofBiologicalSciencesnadBiotechnology， ForestryUniversity，Beijing100083，China； InstiutteofVegetablesnadFlowersChineseAcademyofAgriculturalSciences， Beijing100081，China) Abstract：Theburrowingnematode，Radopholussimilis(Cobb)Thorne，isoneofconsiderableplantquarna— tinepests，itmaybethemostimportantnematodepestonfruitcrops(especiallycitrusnadbnanaa)inhte tropics．TwopairsofprimersR1，R2(RI／2)nadRS1，RS2(RSI／2)weredevelopedtoidentifyhteburro— wingnematode．TheprimerRI／2nadRSI／2couldproduce362bpbnadforallnematodesofgenusRadopho— lus，butonlyR．similisproduced291bpbnad．Atthesametime，hteparametersofPCR wereoptimizedna d sensitivityweretested．Th eoptimizedconditionswerena extensiontemperatureof51．4~C na dprimersconcen— rtationsofRI／2na dRSI／2at0．2txmol／L na d1．2txmoL／L，individually．Th eminimum ma ountofDNA of R．similiscouldbedetectedwasaslow as100Pg，na ditalsocoulddetectDNA from individual nematodena d nematodesrfom sma plesofplna t．Th us，itdemonsrta