香蕉枯萎病菌2种细胞壁降解酶酶活性平板检测方法.pdfVIP

第34卷 第3期 华南农业大学学报 V01．34．No．3 2013年 7月 Journal ofSouthChinaAgriculturalUniversity Ju1．2013 香蕉枯萎病菌 2种细胞壁降解酶酶活性 平板检测方法 施金秀，林先丰，姜乃月，凌金锋，李敏慧，姜子德 (华南农业大学 资源环境学院，广东广州510642) 摘要：以病原真菌香蕉枯萎病菌4号生理小种为材料 ，建立了多聚半乳糖醛酸酶和纤维素酶的平板检测方法．多聚 半乳糖醛酸酶的最佳产酶和检测条件为：诱导底物为果胶，接种孢子终浓度为 1×10mL～，培养时间为3d．37℃ 时检测的多聚半乳糖醛酸酶活性最大；纤维素酶的最佳产酶和检测条件为：诱导底物为羧甲基纤维素，接种孢子终 浓度为 1×10mL～，培养时间为3d，37℃时检测的纤维素酶活性最大．在此基础上，筛选已获得的香蕉枯萎病菌 4号生理小种致病力减弱突变体 ，获得了2株多聚半乳糖醛酸酶和纤维素酶酶活性显著降低的致病突变体． 关键词：香蕉枯萎病菌；纤维素酶；多聚半乳糖醛酸酶；酶活性平板检测 ；致病突变体 中图分类号：$432．1 文献标志码：A 文章编号：1001—411X(2013)03—0340-05 PlateAssaysforMeasurementofTwoKindsofCellWallDegradingEnzymes ActivityinFusarium oxysporum f．sp．cubense SHIJinxiu，LIN Xianfeng，JIANGNaiyue，LINGJinfeng，LIMinhui，JIANGZide (CollegeofNaturalResoursesandEnvironment，SouthChinaAgriculturalUniversity，Guangzhou510462，China) Abstract：Thispaperreportsaplateassaytodetectactivitiesofpolyga1acturonaseandcellulasesecreted byFusariumoxysporumf．sp．cubense(FOC)，whichisthemostdestructivepathogenofbanana．The optimum culturalconditionsforthepolygalacturonaseproductionwereusingpectinasinducedsubstrateto inoculatewith1×10 mL～conidiaofFOC andafterbeingculturedofr3days．Theoptimaltemperature ofpolygalacturonaseactivitywas37 ℃．Theoptimum culturalconditionsforcellulaseproductionwereu— singcarboxymethylcellulose(CMC)asinducedsubstratetoinoculatewith1×10mL conidiaofFOC ininducingmedium afterbeingculturedfor3days．Theoptimaltemperatureofcellulaseactivitywas37 ℃ ．Basedon themethod．twomutantswith impairedpolygalacturonaseandcelluloseactivitywereat— tainedthroughscreeningvirulence—reducedmutantsofFOC． Keywords：Fusarium oxysporum f．sp．cubense；cellulase；polygalacturonase；activitydetection；viru—