绿色荧光蛋白在肿瘤研究中的应用.pdfVIP

维普资讯 介入放射学杂志 2004年 1O月第 13卷第 5期 JInterventionalRadiology2Q ， 01．131 ． — — 469 —— · 综述 · 绿色荧光蛋白在肿瘤研究中的应用 梅雀林 李彦豪 绿色荧光蛋 白(greenfluorescentprotein，GFP)来 不含有某种凋亡调控基因的肿瘤细胞，并对这些肿 源于海洋生物水母，是近年来细胞生物学中应用最 瘤细胞在体内的生物学行为进行观察，可确定这种 为广泛的标记性蛋白质之一。GFP的eDNA全长约 凋亡调控基因的功能。Varghese等H一用含 ras基因 2．6kb，编码238个氨基酸残基，分子量为27×10U。 的PAP2肿瘤细胞和不含 ras基因的NIH3T3肿瘤细 无需加外源性分子，在 395nm、470nm波长光线激 胞分别注入小鼠的门静脉，结果显示 PAP2细胞在 发下，GFP肽链 内部第65～67位的氨基酸残基通过 肝窦内异常增生，而 NIH3T3细胞因凋亡而难以形 自身环化和氧化形成一个绿色荧光基团，性质稳定， 成转移灶。提示 ras基因具有抗凋亡的作用。 使用普通荧光显微镜 即可观察到 。改进后 的 肿瘤细胞浸润是肿瘤细胞粘连、酶降解、移动和 GFP突变型，所发荧光强度高，吸收峰单一，极大地 基质内增殖等一系列过程的表现，其根本原因在于 提高其应用价值。目前，GFP在肿瘤的发病机制、生 肿瘤细胞 内某些基因表达异常。利用 GFP的示踪 物学行为、药效评价和基因治疗等方面得到了广泛 特性 ，研究肿瘤细胞内某些基因异常表达与肿瘤细 的应用。 胞浸润的关系，即可揭示肿瘤细胞浸润的某些机制。 一 、 在肿瘤发病机制研究中的应用 何诚等 为研究 nm23一HI对肿瘤细胞侵袭能力的影 GFP是一个分子量较小的蛋白，易与其他一些 响，将 nm23一HI—GFP分别转染95D、95C人肺巨细胞 目的基因形成融合蛋 白且不影响 自身的 目的基因产 癌，结果转染nm23．HI的95D、95C细胞体外侵袭能 物的空间构象和功能。GFP与 目的基因融合，将 目 力明显低于未转染组 。提示nm23一H1具有抑制肿瘤 的基因标记为绿色，即可定量分析 目的基因的表达 细胞体外侵袭的能力。 水平，显示其在肿瘤细胞内的表达位置和量的变化， 二、在肿瘤生物学行为研究方面的应用 为探讨该基因在肿瘤发生、发展中的作用及其分子 研究肿瘤生长、浸润和转移的传统方法是将载 机制提供便利条件。如乙型肝炎病毒的x基因为 瘤动物分阶段处死，做成光学或免疫组化切片进行 调控基因，影响着乙型肝炎发展、预后，并与肝癌的 观察，或采用 CT、ECT、MRI、PET等影像仪器进行检 发生密切相关。用GFP转染x基因，发现乙型肝炎 测。为了详细了解肿瘤的生物学行为特征，即使使 病毒感染的肝细胞，不管其处于什么周期，x蛋白主 用大量的动物和昂贵的设备，也难以对肿瘤细胞的 要定位于细胞质，与胞液蛋白酶共同分布，其中一部 生长、瘤体形成过程进行连续、动态的观察。曾有报 分紧紧地附着在核膜上。据此推测 x蛋白是通过 道将标记了荧光染料的肿瘤细胞经血管注射到动物 蛋白酶体影响肝细胞的功能。 体内，研究转移病灶形成过程，但 由于标记后肿瘤细 在肿瘤 的形成过程 中，增殖和凋亡是一对相互 胞的荧光信号很易衰减，加上肿瘤细胞分裂 ，通常2 矛盾的统一体。若肿瘤细胞凋亡 占优势，肿瘤组织 ～ 3d后便难以显示或跟踪经荧光标记过的肿瘤细 将长期处于休眠状态或 自行消亡。肿瘤细胞的凋亡