新型超支化聚合物涂层毛细管电泳柱的制备及评价.pdfVIP

第% 卷 分析化学 （IG=MN *:3M:G ）# 研究简报 第 期 # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # # 0 年 月 2B5OPO Q?RS7@ ?T 37@UV587@ 2BO.5PVSU 0 ! / 0% 新型超支化聚合物涂层毛细管电泳柱的制备及评价 !， ! ! # 寿崇琦 # 赵春宾# 周长利 # 张志良# 贾海波 # 李关宾# 陈立仁 ! （中国科学院兰州化学物理研究所，兰州$% ）# # （济南大学化学化工学院，济南’ ） 摘# 要# 以!，!，!(三羟甲基丙烷、丙烯酸甲酯和二乙醇胺为原料合成出超支化聚（胺(酯），通过物理吸附方 法将其涂布于熔融毛细管柱内表面；该方法制备的涂层柱能有效地抑制电渗流和蛋白质在毛细管壁的吸附 作用；在)* ’+ 的缓冲液中，碱性蛋白质的平均柱效为’+ ! , !’ 理论塔板数- . ，且涂层具有良好的稳定性。 关键词# 毛细管电泳，蛋白质，涂层柱，超支化聚合物 ! 引 言 毛细管电泳涂层柱是抑制蛋白质在毛细管壁吸附的有效方法［! / % ］，最常用的方法是采用双官能团 的偶联剂。但由于毛细管柱表面的硅羟基较少，所键合的硅烷化试剂的数量有限，因此，毛细管表面键 合上去的单分子涂层不足以覆盖毛细管壁，而涂层的稳定性也将受到影响。因此，寻求新的性能良好的 涂层材料及涂层方法是研究的一大热点。超支化聚合物由于具有高度支化三维球状结构以及众多的端 基，因而，显示出与相应线性分子截然不同的性质，如低粘度、无链缠绕和良好的溶解性［0 ，’ ］，很容易涂 敷于毛细管柱内壁，形成一薄层。本实验所制的涂层柱在酸性条件下能有效地抑制碱性蛋白质在毛细 管壁的吸附作用，并在)* %+ / 1 + 范围内表现出良好的稳定性和重现性。 # 实验部分 # + ! 试剂与仪器 丙烯酸甲酯、二乙醇胺、!，!，!(三羟甲基丙烷、对甲苯磺酸及二甲亚砜均为分析纯试剂； 细胞色素2 、(胰凝蛋白酶原3（456.7 公司）；溶菌酶（中科院上海生化所东风生化技术公司）。毛细管 ! 为’! 8. , $’ .. 5+ 9+ ，有效长度%’ + ’ 8.（河北永年锐沣色谱器件有限公司）。宾达!1 型毛细管电泳 仪（北京新技术应用研究所）；:;(!0 . 检测器，用= 双同道色谱工作站记录图谱。 # + # 超支化聚合物的制备 在! . 三颈瓶中加入 + ’ .?@ 丙烯酸甲酯， + ’ .?@ 二乙醇胺和’ . 甲醇，混合物在%’A 下搅 拌0 B ，然后抽真空除去甲醇，得无色透明油状物。在该体系中加入’’ + 1 .6 对甲苯磺酸，分别加入 $!+ % 、%’0 + 1 和!$C + ! .6 的三羟甲基丙烷，升温至1A 保持0 B ，再抽真空除去生成的甲醇，分别制得 超支化聚（胺(酯）第五代（D’ ）、第六代（DC ）、第七代（D$ ）。 # + $ 毛细管电泳柱的制备 取一定长度的毛细管柱，将超支化聚合物吸入毛细管柱内，在 + ! EF7 的氮气流下将涂渍液缓慢吹 出，在室温下干燥0 B 。然后，将毛细管置于气相色谱炉内，在 + ! EF7 的氮气流下以’A- .5 速率从 ’ A 程序升温至!’ A ，并保持% B 。涂层毛细管柱在使用前用缓冲液平衡! B 。 # + % 实验方法 电渗流（GHI ）的测定以!J 的二甲亚砜（KE4H ）水溶液为中性标记物，工作电压!C + L; ，测定不 同)* 下的电渗迁移时间。碱性蛋白质在)* ’ + 的磷酸盐缓冲液条件下进行分离，分离电压!+ L; 。 $ 结果与讨论 $ + ! 超支化聚合物的结构表征 (!!(!% 收稿；%(’(% 接受 $3$ 4 4 分析化学 第%$ 卷 ! ! ! # 超支化聚合物的红外