灿烂甲酚蓝与表面活性剂的作用及其在蛋白质测定中的应用.pdfVIP

( ) 第 30 卷 分析化学 FENXI HUAXUE 　研究简报 第 3 期 　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　 2002 年 3 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 324～326 灿烂甲酚蓝与表面活性剂的作用及其在蛋白质测定中的应用 高　峰　朱昌青　汪乐余　王　伦 (安徽师范大学化学与材料科学学院 ,芜湖 241000) ( ) 摘　要 　对阳离子染料灿烂甲酚蓝 BCB 在阴离子表面活性剂存在时的溶液的吸收光谱进行了研究。同时 还研究了 BCB 在阴离子表面活性剂作用下形成的现场二聚体的荧光性能 ,并用其现场二聚体作为探针 ,首次 用于蛋白质的测定 ,结果令人满意。用于牛血清白蛋白的测定 ,线性范围为 0～7 mg/ L ,检测限为 3. 66 ×10- 3 mg/ L 。 关键词 　灿烂甲酚蓝 ,阴离子表面活性剂 ,牛血清白蛋白 ,吸收光谱 ,荧光光谱 1 　引　　言 近年来 ,二聚体荧光染料作为一类新的荧光探针引起了人们的极大兴趣。1993 年 Rhy 等1 报道了 ( ) ( ) 以合成的噻唑橙二聚体 TOTO 和　唑黄二聚体 YOYO 为荧光探针测定 DNA ,具有很高的灵敏度。郭 祥群等2 ,3 则考察了在表面活性剂作用下形成的吖啶橙及番红花红 T 弱荧光现场二聚体的性质及其与 核酸的作用 ,并用于核酸的定量分析也获得成功。而染料现场二聚体作为荧光探针用于蛋白质的测定 却未见报道。灿烂甲酚蓝是一种阳离子染料 ,本文考察了其在阴离子表面活性剂存在时溶液状态下的 吸收光谱 ,并对染料分子在表面活性剂分子胶束前预聚集过程中形成的二聚体用作蛋白质定量测定的 荧光探针进行了研究 ,取得了令人满意的结果。BCB 弱荧光二聚体可望成为一种良好的蛋白质探针。 2 　实验部分 2 . 1 　试剂与仪器 ( ) - 4 ( 灿烂甲酚蓝 BCB ,上海化学试剂公司 ,分析纯 ,配成 1 ×10 mol/ L 水溶液 ;牛血清白蛋白 BSA ,上 ) 海化学试剂公司 ,用 0. 5 %NaCl 溶液配制成 100 mg/ L 储备液 ,置 1～4 ℃保存备用;十二烷基磺酸钠 ( ) ( ) ( ) SLS 、十二烷基硫酸钠 SDS 上海化学试剂公司 ,分析纯。实验用水为二次去离子亚沸水。 ( ) ( ) RF540 型荧光分光光度计 日本岛津公司 ,UV240 型紫外可见分光光度计 日本岛津公司 。 2 . 2 　实验方法 在 10 mL 容量瓶中分别取 1. 0 mL BCB 溶液及一定量的表面活性剂 ,混合均匀。然后加入一定量的 BSA 溶液 ,用水稀释至刻度 ,室温下放置 30 min ,测定其荧光强度或吸收光谱。 3 　结果与讨论 3 . 1 　BCB 与阴离子表面活性剂的作用及吸收光谱 4