大绒鼠（Eothenomy miletus）微卫星多态性引物的筛选.docVIP

 大绒鼠（Eothenomy miletus）微卫星多态性 引物的筛选# 5 10 15  摘要：大绒鼠是横断山区的固有种。本研究利用大绒鼠 40 个个体设计出 12 对微卫星引物， 其有效等位基因（Na）2-5 个，观测杂合度（HO）、期望杂合度（HE）及多态信息含量（PIC） 分别为 0.111 to 0.465，0.457 to 0.707，0.4073 to 0.6741。筛选出的 12 对引物中 Emj 2-43 和 Emj 2-54 属于高度多态性座位，其余 10 对均为中度多态性座位，这些微卫星引物的筛选可 用于今后更进一步的种群研究。 关键词：分子生态学；大绒鼠；微卫星；种群结构 中图分类号：Q95 Isolation and polymorphic loci of microsatellite in Eothenomys miletus (Microtinae Eothenomys) ZHU Wanlong, WANG Zhengkun, LIU Chunyan (School of Life Science, Yunnan Normal University, KunMing 650500) Abstract: The Oriental vole Eothenomys miletus (Microtinae: Eothenomys) is an endemic species distributed in Hengduan mountain region. In this study, twelve microsatellite loci were 20 25 30 35 isolated from this species. Analysis of 40 individuals showed that the number of alleles ranged from two to five with observed heterozygosity ranged from 0.111 to 0.465, expected heterozygosity ranged from 0.457 to 0.707, and polymorphic information content ranged from 0.4073 to 0.6741. These microsatellite loci will be of practical use for population structure, mating system and inbreeding studies in E. miletus. Keywords: molecular ecology; Eothenomys miletus; microsatellite markers; population structure 0 引言 微卫星 DNA，又称简单重复序列（simple sequence repeats, SSR）、短串连重复（short tandem repeat, STR），以 1-6 的短核苷酸序列（一般称为核心序列）为基本单位，呈串联重 复状分布于生物体整个基因组中[1]。微卫星序列在群体中通常具有很高的多态性，而且一般 为共显性，因此是一类很好的分子标记[2-6]。被广泛生物遗传作图、群体遗传研究、个体间 亲缘关系鉴定等方面，且该技术的出现有助于推测种群历史上经历过的变动或预测将来的种 群动态变化，以及揭示种群的重要历史进程[7-8]。 大绒鼠（Eothenomys miletus）分布于横断山地区[9-10]，属于田鼠亚科（Arvicolinae）动 物。绒鼠自化石发现于横断山以来，至今未见关于该类物种经过大规模扩散和迁移的报道。 对该亚科动物研究有利于对上新世——第四纪原始气候和环境的了解[11-12]。本研究利用磁珠 富集方法，从大绒鼠基因组中分离筛选出微卫星位点，为进一步阐明横断山对绒鼠生存适应 及其遗传分化和物种形成奠定基础。 -1- 1 材料和方法  40 45  1.1 动物来源 本研究中的中缅树鼩样本均为成年个体，分别来自云南省昆明市禄劝县屏山镇（海拔 1679m，北纬 25°25～26°22，东经 102°13～102°57）灌丛；剑川县石龙村（海拔 2500m， 北纬 26°15～26°45，东经 99°40～99°55）果园；丽江地区（海拔 2750m，北纬 26°4023.5， 东经 99°.4841.3）灌丛，取其肝脏组织于 75%酒精保存。 1.2 基因组 DNA 的提取 组织进行脱醇后用标准蛋白酶 K/酚：氯仿：异戊醇方法提取基因组 DNA[13]。利用 4 只 云南剑川捕捉