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 不同蚕品种两种类型乙酰胆碱酯酶基因多 态性分析# 5 10 15 20 25 30 35 40  摘要：研究表明昆虫乙酰胆碱酯酶基因（ace）突变会引起抗药性。为了探析家蚕乙酰胆碱 酯酶基因突变与家蚕农药抗药性的关系，本研究测试了毒死蜱与残杀威对 24 种家蚕毒杀的 半效致死浓度（LC50 值），然后克隆、测序了这 24 种家蚕以及另外 7 种家蚕两种类型的 乙酰胆碱酯酶基因，通过分析，在 1 型乙酰胆碱酯酶基因（ace1）上发现了 63 个氨基酸突 变，在 2 型乙酰胆碱酯酶基因（ace）2 上发现了 14 个氨基酸突变，这表明 2 型乙酰胆碱酯 酶比 1 型乙酰胆碱酯酶基因更为保守。同时分析表明，24 种家蚕 ace 突变与家蚕对毒死蜱 和残杀威抗性没有直接关系，这些突变的诱因及功能有待于进一步分析。 关键词：乙酰胆碱酯酶；家蚕；基因多态性 中图分类号：Q754 Gene polymorphism analysis for two types of acetylcholinesterase of different kinds of silkworm Lang Guojun, Pan Penglu, Ye Yuxuan, Zhang Chuanxi (Institute of Insect Science, Zhejiang University, HangZhou 310058) Abstract: It was reported that some mutations in the acetylcholinesterase(AChE) gene of insect was responsible for pesticides resistance. To examine if ace gene mutation had a role in resistance in Bombyx mori. strains, this study tested the LC50 values of chlorpyrifos and propoxur on 24 strains of B. mori, then we cloned and sequenced the AChE gene from 31 strains. The LC50 values of chlorpyrifos and propoxur on different strains of B. mori with distinguished change, and gene mutations was been found. But these mutations lack of correlation with chlorpyrifos and propoxur resistance, and based on the results of phylogeny analysis, we can conclude that ace2 is more conserved than ace1. The causes of these mutations and the function of the mutated AChE need to be determined for further. Keywords: Acetylcholinesterase; Polymorphism; Silkworm 0 引言 研究表明，昆虫乙酰胆碱酯酶基因（ace）的突变导致其对有机磷（OP）和氨基甲酸酯 （CB）类杀虫剂的亲和力降低，从而表现出敏感度下降。而 ace 变构是由 ace 突变引起的。 至今已在多种昆虫中报导了与 ace 突变相关的抗性。检测昆虫在没有农药筛选压力条件下 ace 基因多样性，将为深入研究 ace 突变机理和抗性发生发展规律提供理论基础。 家蚕是最重要的农林害虫类群-鳞翅目昆虫的模式昆虫，由于人工饲养，与环境中农药 的接触比较少，同时品种丰富，这为 ace 多样性研究提供了好的材料，具有独特的研究价值。 我国是世界蚕业的发源地，也是家蚕原产地，家蚕的驯养已经有 6000 多年的历史。据统计， 目前全国收集 、保存的家蚕种质资源达 1000 余份[1]。昆虫研究的主要目的是保护益虫，防 治害虫。而目前防治害虫最有效的方式是使用杀虫剂，其中以昆虫的 AChE 为靶标的农药占 到目前世界上农药使用量的三分之一以上[2]。家蚕丰富的种质资源为研究 AChE 的农药敏感 -1-  性、基因多样性提供了便利。 本研究对 24 个家蚕品种进行了生物活性测定，对 31 个家蚕品种和野蚕 （浙江种） 的 1、2 型 AChE 基因进行了 PCR 扩增和序列