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* * 动物细胞工程常用的技术手段 动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础 动物细胞培养；动物细胞融合 单克隆抗体；胚胎移植；核移植 (一)动物细胞培养 (二)动物细胞融合 (三)单克隆抗体 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 胰蛋白酶 10代细胞 原代培养 50代细胞 传代培养 细胞株 无限传代 细胞系 单个细胞 加培养液 （1）动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独特之处？ 独特之处：1、液体培养基 2、成分中有动物血清等 营 养 需 要 基本营养物质：包括水、葡萄糖、氨基酸、维生素及一些无机离子。 血清：体外培养细胞既需要上述基本营养物质，还需 要促细胞生长因子等物质才能正常生长、繁殖。血清中含有多种这类物质，有利于多数细胞的存活和生长。（相当于植物激素） （2）为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？ 因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强。 动物组织细胞之间有一定量的弹性纤维和胶原纤维等蛋白质，使细胞紧密地结合在一起。 弹性纤维和胶原纤维蛋白易被胰蛋白酶分解，使细胞分散开。 （3）胰蛋白酶的作用是什么? （4）为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？ 动物体细胞大都生活在液体的环境中,离体后的动物组织失去了液体环境，分散了制成细胞悬浮液利于培养。 （5）动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？ 不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能培养成新的动物个体 （6）细胞系能无限传代，它是什么细胞？它的遗传物质和正常体细胞相比有什么不同？ 细胞系的细胞是癌细胞，原癌基因发生了突变，所以细胞系的细胞遗传物质发生了改变。 细胞悬浮液 10代细胞 50代细胞 无限传代 原代培养 传代培养 细胞株 细胞系 多数组织细胞固定在表面生长和分裂。 随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖 遗传物质改变 海拉(hela)细胞系 植物体 培养结果 获得细胞或细胞 分泌蛋白 培养目的 葡萄糖 动物血 清 蔗糖 植物激素 液体培养基 固体培养基 培养基性质 细胞增殖 细胞的全能性 原理 动物细胞培养 植物组织培养 比较项目 细胞株、细胞系 植物体 培养结果 分泌蛋白 快速繁殖、培育 无病毒植株 培养目的 葡萄糖 动物血 蔗糖 植物激素 培养基特有成分 液体培养基 固体培养基 培养基性质 细胞的全能性 原理 动物细胞培养 植物组织培养 比较项目 植物组织培养和动物细胞培养的比较 动物细胞培养技术的应用 （1）生产蛋白质生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。 （2）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。 （3）用于检测有毒物质 （4）用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据 原代培养表皮细胞和真皮细胞用于皮肤移植 表皮细胞 细胞A 细胞B 杂种细胞 灭活的病毒 物理法 化学法 仙台病毒 疱疹病毒 新城鸡瘟病毒 （二）动物细胞融合 诱导动物细胞融合的方法 物理法：离心、振动、电刺激 化学法：聚乙二醇（PEG） 生物法：灭活的动物病毒 （丧失感染活性） 用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程 细胞核 病毒颗粒 细胞核 化学方法 主要用于制备 单克隆抗体 获得杂种植株 用途 物理、化学方法 （同左） 灭活的病毒 物理（离心、振 荡、电刺激） 化学（聚乙二醇） 诱导方法 使细胞分散后诱 导细胞融合 去除细胞壁后诱 导原生质体融合 细胞融合的方法 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性、 植物细胞全能性 细胞融合的原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 比较项目 植物、动物细胞融合的比较 （1）什么是抗体？抗体存在于动物的哪种结构中？如何获得抗体？ 抗体是由效应B细胞分泌的，并能和相应的抗原结合发生免疫反应的球蛋白。抗体主要存在于血清中。可以从血清中提取抗体。 设计方案：由于每一种B淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体，利用单个B淋巴细胞进行体外细胞培养（克隆），这种方式获得的抗体具有专一性。 （2）如何获得只针对一种抗原的抗体？ 这种抗体由于是用单个B细胞克隆得到的细胞群分泌的，其化学性质单一、特异性强，因此这种抗体又叫做单克隆抗体。 接受抗原刺激后，能分泌针对该抗原的特异性抗体，在体液免疫中具有重要功能。 B淋巴细胞本身是一种终末分化细胞，通常不再进行细胞分裂，存活一段时间后便会死亡——短命细胞 B淋巴细胞 但是B淋巴细胞在体外培养时不能无限增殖，而癌细胞是可以无限增殖的。因此可以利用小鼠骨髓瘤细胞与之融合，就可获得既能无限增殖又能产生单一抗体的细胞。 骨髓瘤细胞 : 恶性增殖的转化细胞，只要营养条件适合