肝脏蛋白的提取和浓度测定.pptVIP

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2025-11-27 发布于广东
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肝脏蛋白的提取和浓度测定.ppt

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第1页，共18页，星期日，2025年，2月5日实验目的了解并掌握蛋白质的提取方法了解掌握考马斯亮蓝法（Braford法）测定蛋白质含量的原理和方法第2页，共18页，星期日，2025年，2月5日实验内容实验目的◆肝脏组织蛋白的提取◆蛋白的浓度测定第3页，共18页，星期日，2025年，2月5日原理：RIPA裂解液是一种传统的细胞组织快速裂解液，主要裂解成分含1%TritonX-100,0.5%胆氧胆酸钠（sodiumdeoxycholate）,0.1%SDS，得到的蛋白样品可以用于常规的Western。1.肝脏组织的提取第4页，共18页，星期日，2025年，2月5日操作步骤超声匀浆冰上放置4度离心吸取上清1.肝脏组织的提取组织取材第5页，共18页，星期日，2025年，2月5日1.肝脏组织的提取（1）组织取材：取约100mg大鼠肝脏组织，用灭菌的剪刀将组织块尽量剪碎，放入1.5ml灭菌的EP管中第6页，共18页，星期日，2025年，2月5日1.肝脏组织的提取（2）超声匀浆：加0.5mlRIPA裂解液（含50ulPMSF）,置于冰上，用超声匀浆器进行匀浆,超声每次10秒，重复3次第7页，共18页，星期日，2025年，2月5日1.肝脏组织的提取（3）冰上放置：裂解完全后，冰上放置30分钟第8页，共18页，星期日，2025年，2月5日1.肝脏组织的提取（4）4度离心：放入离心机中，4℃12000rpm离心5min第9页，共18页，星期日，2025年，2月5日1.肝脏组织的提取（5）吸取上清：取上清分装于0.2ml离心管中并置于－20℃保存，待用第10页，共18页，星期日，2025年，2月5日超声匀浆要保持低温超声强度以不产生泡沫为准注意事项第11页，共18页，星期日，2025年，2月5日2.蛋白的浓度测定考马斯亮蓝法BCA法紫外吸收法Lowry法(Folin-酚试剂法)双缩脲法第12页，共18页，星期日，2025年，2月5日第13页，共18页，星期日，2025年，2月5日