DB13-T 1109-2009 食品中过敏原卵蛋白的测定 酶联免疫法.docxVIP

DB13T食品中过敏原卵蛋白的测定酶联免疫法

本标准规定了食品中过敏原卵蛋白的酶联免疫测定方法。本标准适用于各类食品中卵蛋白过敏原的定性及定量检测。

卵蛋白是常见的食物过敏原之一，主要存在于鸡蛋及其制品中。卵蛋白过敏是婴幼儿和儿童最常见的食物过敏类型，严重时可危及生命。因此，建立准确、灵敏的卵蛋白检测方法对于食品安全监管、过敏原标识管理以及保护过敏人群健康具有重要意义。

酶联免疫吸附测定法（ELISA）具有特异性强、灵敏度高、操作简便、适合批量检测等优点，已成为食品中过敏原检测的重要技术手段。本标准采用双抗体夹心ELISA法，通过特异性抗体与卵蛋白抗原的结合反应，实现对食品中微量卵蛋白的精确检测。

本标准规定的检测方法检出限为0.5mg/kg，定量限为1.5mg/kg，能够满足国内外相关法规对食品中过敏原检测的要求。该方法适用于各类食品基质，包括热加工食品、发酵食品等复杂样品的检测。

本标准所用的主要仪器设备包括：酶标仪（配备450nm滤光片）、微量移液器（10100μL、20200μL、1001000μL）、恒温水浴箱、离心机（转速≥4000r/min）、冰箱（4℃和20℃）、电子天平（感量0.001g）以及96孔酶标板等。所有玻璃器皿需经121℃高压灭菌30min处理，塑料器具应选用无DNA酶和RNA酶的专用产品。

试剂要求如下：卵蛋白标准品（纯度≥95%）、辣根过氧化物酶标记的卵蛋白特异性抗体、卵蛋白单克隆抗体包被的酶标板、TMB底物溶液、终止液（2mol/L硫酸）、磷酸盐缓冲液（PBS，pH7.4）、含0.05%Tween20的PBS洗涤液（PBST）、样本提取液（pH8.0的TrisHCl缓冲液，含1%TritonX100）。所有试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T6682规定的二级水标准。

样品制备需根据不同食品特性采用相应处理方法。固体样品应粉碎后过20目筛，液体样品需充分混匀，油脂类样品需经正己烷脱脂处理。称取5.0g（精确至0.01g）样品于50mL离心管中，加入20mL样本提取液，涡旋振荡2min后，室温放置30min，期间每隔10min振荡一次。然后以4000r/min离心10min，取上清液备用。若样品中卵蛋白含量过高，需用PBS进行适当稀释后再进行测定。

结果计算采用标准曲线法。以标准系列浓度为横坐标，对应的吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线，建立线性回归方程。将样品的吸光度值代入回归方程，计算出样品中卵蛋白的浓度。若样品经过稀释，需乘以相应的稀释倍数。方法的精密度要求：在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。回收率试验要求：在空白样品中添加3个浓度水平的卵蛋白标准品，每个水平做6次平行测定，回收率应在80%110%之间。

质量控制要求每批测定必须同时进行空白对照、阴性对照和阳性对照。空白对照应为未加样品的提取液，阴性对照应选用已知不含卵蛋白的食品样品，阳性对照应选用添加已知浓度卵蛋白的食品样品。只有当空白对照的吸光度值小于0.1，阴性对照为阴性，阳性对照的测定值在预期范围内时，该批测定结果才有效。

本标准由河北省质量技术监督局提出并归口，主要起草单位为河北省食品质量监督检验研究院。本标准主要起草人：张明、李华、王强、刘芳、赵伟。本标准自2009年12月1日起实施，代替DB13/T食品中过敏原卵蛋白的测定酶联免疫法》。