高考生物精品【一轮复习】讲义练习资料合集 (13).docxVIP

一、DNA片段的扩增

1．实验原理

2．实验步骤

二、PCR扩增产物的电泳鉴定

1．实验原理

2．实验步骤

三、操作提示

1．为避免外源DNA等因素的污染，PCR实验中使用的微量离心管、枪头和蒸馏水等在使用前必须进行________处理。在向微量离心管中添加反应组分时，每吸取一种试剂后，移液器上的枪头都必须更换。

2．缓冲液和酶应分装成小份，并在__________储存。使用前，将所需试剂从冰箱拿出，放在冰块上________融化。

四、关键点拨

1．PCR扩增目的基因时，复性温度的设定是成败的关键。复性温度过高会破坏引物与模板的碱基配对，复性温度过低又会造成引物不能与DNA模板链的特定部位结合。复性温度的设定与________、________有关，假设引物的长度相同，在G、C含量高时，设定的复性温度要____一些。因为DNA分子中G—C之间有____个氢键，A—T之间有____个氢键。

2．未出现扩增条带的主要原因

(1)TaqDNA聚合酶失活。

(2)引物出现质量问题。

(3)Mg2＋浓度过低。

(4)变性时的温度____，变性时间短。

3．出现非特异性扩增条带的主要原因

(1)模板DNA出现________。

(2)引物特异性不强或形成引物二聚体。

(3)Mg2＋浓度________。

(4)复性时的温度________等。

例1(2023·云南昆明高二月考)关于“DNA片段的扩增及电泳鉴定”实验，下列相关叙述正确的是()

A．PCR仪实质上就是一台能自动调控温度的仪器，但在使用时需根据扩增的DNA片段以及引物的情况人工设定合适的温度

B．PCR反应体系中需加入耐高温的DNA聚合酶，该酶主要在复性过程中起作用

C．为避免外源DNA等因素的污染，PCR实验中使用的微量离心管、枪头、蒸馏水和移液器等在使用前都必须进行高压灭菌处理

D．电泳时，电泳缓冲液不能没过凝胶，以免凝胶加样孔中的电泳样液流出

例2用PCR方法检测转基因植株是否成功导入目的基因时，得到以下电泳图谱，其中1号为DNA标准样液(Marker)，10号为蒸馏水，PCR时加入的模板DNA如图所示。据此作出的分析，不合理的是()

A．PCR产物的分子大小在250～500bp之间

B．3号样品为不含目的基因的载体DNA

C．9号样品对应植株不是所需的转基因植株

D．10号确定反应体系等对结果没有干扰

1．使用PCR仪的正确实验操作顺序应为()

①设置好PCR仪的循环程序②按配方准备好各组分③用微量移液器在微量离心管中依次加入各组分④进行PCR反应⑤离心使反应液集中在离心管的底部

A．②⑤③④① B．①⑤③②④

C．②③⑤①④ D．④②⑤③①

2．下列关于PCR操作过程的叙述，错误的是()

A．PCR实验中使用的微量离心管、枪头和蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌处理

B．PCR所用的缓冲液和酶应分装成小份，在－20℃储存

C．将PCR所用缓冲液和酶从冰箱拿出，需放在高温环境中迅速融化

D．在向微量离心管中添加反应组分时，每吸取一种试剂后，移液器上的枪头都必须更换

3．(2023·重庆渝中区高二期中)某实验利用PCR技术获取目的基因，实验结果显示除目的基因条带(引物与模板完全配对)外，还有2条非特异条带(引物和模板不完全配对)。为了减少非特异条带的产生，以下措施中有效的是()

A．增加模板DNA的量

B．延长热变性的时间

C．延长延伸的时间

D．提高复性的温度

4．下列有关电泳的叙述，不正确的是()

A．电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程

B．待测样品中DNA分子的大小和构象、凝胶的浓度等都会影响DNA在电泳中的迁移速率

C．进行电泳时，带电分子会向着与其所带电荷相同的电极移动

D．PCR的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定

5．为优化目的基因(700bp)的PCR条件，研究者设计不同的复性温度进行实验，产物的琼脂糖凝胶电泳结果如图。据图分析，下列有关说法错误的是()

A．对照组可用无菌蒸馏水代替模板，其他成分相同

B．电泳条带的宽度、亮度与扩增产物大小呈正相关

C．复性温度的高低会影响PCR扩增产物的纯度

D．58℃是本实验中扩增该基因的最佳复性温度

6．(2023·江苏扬州高二期末)在基因工程操作中，科研人员利用两种限制酶(R1和R2)处理基因载体，进行琼脂糖凝胶电泳检测，结果如图所示。下列相关叙述不正确的是()

A．电泳时，核酸的移动方向是从负极到正极的

B．该载体最可能为环状DNA分子

C．限制酶R1与R2的切点最长相距约600bp

D．两种限制酶在载体上识别的序列可能相同