高中生物PCR技术原理与反应过程分析.pdfVIP

第17多聚酶链式反应扩增片段

目标导航1.知道细胞内参与的各种组成成分与反应条件；知道合成

方向。2.理解PCR的原理；掌握PCR的基本步骤及每个步骤前后发生的变化。

一、PCR技术的原理

1.PCR扩增方向

(1)3′端和5′端：为了明确地表示的方向，通常将的羟基(—OH)末端称为

，而含的末端称为；一个双链分子中含两个3′端和

两个5′端，如果一条链的方向是，则另一条链的方向就是，这就是反向

平行的含义。

(2)分子中相邻两个脱氧核苷酸残基通过相连，该化学键是由一

分子脱氧核苷酸中3号碳原子上的羟基(—OH)，与相邻的另一分子脱氧核苷酸中5号碳原

子上的磷酸基团脱水聚合而成。所以的合成方向总是从子链的向延

伸。

2.PCR技术原理

(1)PCR原理：分子在一定条件下可以进行半保留。

(2)的热变性原理：在的温度范围内，的双螺旋结构将，双链分

开，这个过程称为；当温度缓慢下降后，两条被分离的链又会重新结合成双

链，这个过程称为。

3.生物体内与PCR反应的区别

体内PCR反应

在作用下，细胞能量，部分加热至，双链全部解开，不需解

解旋

解开旋酶

引物一小段RNA可以是RNA或单链分子片段

在引物基础上，一条链连续合成，另一分别从两条链的开始，都是连续

合成子链

条链不连续合成合成，控制温度

特点，半保留体外迅速扩增

Taq

_

聚合酶

循环次数受生物体自身控制30多次

生物体内的和PCR体外扩增都需要、作原料、

相同点，子链延伸的方向都是从到，且都需要在一定的缓冲溶液中

进行

二、PCR的反应过程

1.反应条件

(1)稳定的缓冲液环境。

(2)模板。

(3)分别与模板两条模板链相结合的两种引物。

(4)A、T、G、C四种脱氧核苷酸。

(5)耐高温的聚合酶，一般用