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药学-中药鉴定学(皮类和茎木类药材)茎木类药材高效液相鉴别试题及答案

药学-中药鉴定学(皮类和茎木类药材)：茎木类药材高效液相鉴别试题及答案

（一）考查目的与理论基础

1.考查目的

本部分主要考查学生对茎木类药材高效液相色谱（HPLC）鉴别方法的理解和应用能力，包括：

-掌握HPLC鉴别原理及其在茎木类药材中的应用。

-熟悉典型茎木类药材（如杜仲、厚朴、黄柏等）的HPLC指纹图谱特征。

-能够根据HPLC图谱进行药材真伪鉴别和品种区分。

-理解HPLC鉴别与其他鉴定方法（如性状、显微、理化）的互补性。

2.理论基础

高效液相色谱（HPLC）是一种基于混合模式色谱分离原理的分析技术，通过液体作为流动相，利用固定相（如C18、HPLC-Sil）对药材中的化学成分进行分离和检测。茎木类药材的化学成分主要包括黄酮类（如杜仲的绿原酸）、香豆素类（如厚朴的厚朴酚）、生物碱类（如黄柏的小檗碱）等，这些成分在HPLC条件下具有较好的分离度和检测灵敏度，因此成为重要的鉴别手段。

HPLC鉴别的主要依据包括：

1.色谱行为：保留时间、峰形、峰面积。

2.指纹图谱：多峰特征、峰位相对比例。

3.化学计量学分析：通过主成分分析（PCA）、聚类分析（HCA）等方法对多批次药材进行综合评价。

（二）核心知识点总结

1.茎木类药材的化学成分

-杜仲：绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷、桃叶珊瑚苷等。

-厚朴：厚朴酚、和厚朴酚、木兰苷等。

-黄柏：小檗碱、黄柏碱、木兰花碱等。

-牡丹皮：牡丹酚、牡丹酚苷、挥发油等。

-肉桂：桂皮醛、桂皮酸、挥发油等。

2.HPLC鉴别方法

（1）色谱条件

-流动相：常用乙腈-水、甲醇-水梯度洗脱。

-检测波长：根据成分性质选择（如绿原酸254nm、小檗碱257nm）。

-柱温：25-40℃。

（2）指纹图谱技术

-相似度评价：采用《中国药典》规定的NIST或峰谷法计算相似度。

-特征峰标注：结合对照品或文献确定峰位。

（3）定量分析

-内标法：提高检测准确性。

-含量测定：如厚朴酚和和厚朴酚的测定。

3.典型药材HPLC特征

|药材|主要成分|HPLC特征|

|------------|----------------|------------------------------------------|

|杜仲|绿原酸|保留时间约8-12min，峰形对称|

|厚朴|厚朴酚|保留时间约10-15min，与其他酚类成分分离|

|黄柏|小檗碱|保留时间约6-9min，峰形尖锐|

|牡丹皮|牡丹酚|保留时间约7-11min，紫外吸收强|

|肉桂|桂皮醛|保留时间约5-8min，香气成分峰多|

（三）具体鉴别方法（以厚朴为例）

1.性状鉴别

-药材性状：厚朴呈板状、块状或卷筒状，外表面灰棕色或灰褐色，有明显的纵纹。

-粉末特征：淡黄色，纤维性，可见油细胞。

2.显微鉴别

-横切面：木栓层细胞多列，石细胞群散在或成群。

-粉末：纤维长梭形，草酸钙针晶束。

3.理化鉴别

-薄层色谱（TLC）：厚朴酚和和厚朴酚在香草醛-硫酸反应中显红色。

-紫外光谱（UV）：主要成分在257-260nm有最大吸收。

4.高效液相色谱（HPLC）鉴别

（1）色谱条件

-色谱柱：AgilentZorbaxEclipseXDB-C18（4.6×150mm，5μm）。

-流动相：乙腈-0.1%磷酸水溶液（0-30min，10%-50%乙腈）。

-检测波长：297nm。

-柱温：30℃。

（2）对照品溶液

-厚朴酚：1mg/mL甲醇溶液。

-和厚朴酚：1mg/mL甲醇溶液。

（3）供试品溶液

-取厚朴粉末（40目）1g，加甲醇20mL，超声提取30min，过滤，定容至50mL。

（4）指纹图谱

-典型图谱：厚朴HPLC指纹图谱如图1所示，主要特征峰标注于图2。

（此处插入图谱示例）

5.DNA条形码技术

-PCR扩增：ITS和rbcL基因片段。

-测序分析：与数据库比对（如NCBIGenBank）。

（四）常见真伪品与混淆品对比表

|药材|真品特征|伪品特征|HPLC差异|

|------------|---------------------------|-----------------------------------|-----------------------------------|

|厚朴|厚朴酚、和厚朴酚含量高|混伪品（如辛夷）成分差异大|峰形、保留时间明显不同|

|杜仲|绿原酸含量高|混伪品（如桑白皮）无绿原酸|特征峰缺失|

|黄柏|小檗碱含量高|混伪品（如关黄柏）小檗碱含量低|峰面积差异大|

|牡丹皮|牡丹酚苷含量高|混伪品（如根皮）成分不同|指纹图谱相似度低|

|肉桂|桂皮醛含量高|混伪品（如桂仲）成分差异|特征峰缺失或变形|

（五）试题部分

1.