高效液相色法.pptVIP

1．紫外检测器应用最广：适于约有70％的样品。灵敏度高：线性范围大：死体积小：（1mm×10mm，8μL）；对流动相的流速和温度变化不敏感。分类：固定波长型、可调波长型和二极管阵列检测器。特点：第30页，共56页，星期日，2025年，2月5日固定波长：254nm或280nm固定波长紫外检测器第31页，共56页，星期日，2025年，2月5日2．荧光检测器工作原理：利用某些试样具有荧光特性进行检测。特点：高灵敏度、高选择性；对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应；第32页，共56页，星期日，2025年，2月5日第33页，共56页，星期日，2025年，2月5日3．示差折光检测器工作原理：折光指数与组成有关，连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值。差值与浓度呈正比；特点：通用型检测器；灵敏度低、对温度敏感、不能用于梯度洗脱。分类：偏转式、反射式和干涉型三种。第34页，共56页，星期日，2025年，2月5日偏转式：它是基于折射率随介质中的成分变化而变化，如入射角不变，则光束的偏转角是流动相(介质)中成分变化的函数。因此，测量折射角偏转值的大小，便可得到试样的浓度。第35页，共56页，星期日，2025年，2月5日第36页，共56页，星期日，2025年，2月5日第二节液相色谱中的固定相和流动相一、液相色谱固定相二、液相色谱流动相第37页，共56页，星期日，2025年，2月5日一、液相色谱固定相1．按固相材料的刚性程度分类刚性固体硅胶：用于液固色谱的固定相，液相色谱的担体，化学键合固定相基质材料。硬质凝胶聚苯乙烯与二乙烯基苯交联而成的多孔颗粒：只应用在离子交换色谱和凝胶色谱中。第38页，共56页，星期日，2025年，2月5日2．按固相填料的疏松程度分类薄壳型微珠载体（表面多孔型）构成：30～40μm的玻璃微球，表面附着一层厚度为1～2μm的多孔硅胶、多孔氧化铝或分子筛等，形成壳形结构。特点：①多孔层厚度小、孔浅、柱效高；②分配过程在载体表面进行，出峰快；③颗粒大，装柱容易，适于常规分析。第39页，共56页，星期日，2025年，2月5日全多孔型载体构成：硅胶、氟化铝或硅藻土的微粒凝聚而成多孔球体。特点：颗粒较细，整个微粒全部是多孔性物质，表面积大，负荷量大。适合于复杂混合物分离和痕量分析。第40页，共56页，星期日，2025年，2月5日第1页，共56页，星期日，2025年，2月5日高效液相色谱法的特点1.高压：对流动相施加高压，使其迅速地通过色谱柱液；2.高效：分离效率大高，甚至可实现手性分离；3.高灵敏度：采用高灵敏度的检测器;4.速度快：与经典液相色谱法相比，高效液相色谱法所需的分析时间较少，一般少于1h；5.应用范围更广。第2页，共56页，星期日，2025年，2月5日HPLC与GC的比较相同点：具分离和分析功能，均可以在线检测。不同点：分析对象GC：适于能气化、热稳定性好、沸点较低的样品，不适于高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及高聚物的样品。占有机物的20%。HPLC：不受样品挥发性和热稳定性的限制，适于溶解后能制成溶液的样品；分子量大、难气化、热稳定性差及高分子和离子型样品。占有机物的80%以上。第3页，共56页，星期日，2025年，2月5日流动相GC：流动相为惰性气体，如H2、N2、He、Ar；组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用。HPLC：流动相为液体；流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、改善分离度，增加了额外因素，如流动相极性、pH值、不同比例的两种或两种以上液体的配比。流动相种类较多，选择余地广。第4页，共56页，星期日，2025年，2月5日GC：加温操作。HPLC：室温；高压（液体粘度大，峰展宽小）。操作条件第5页，共56页，星期日，2025年，2月5日第一节高效液相色谱仪第6页，共56页，星期日，2025年，2月5日第7页，共56页，星期日，2025年，2月5日第8页，共56页，星期日，2025年，2月5日第9页，共56页，星期日，2025年，2月5日主要部件：高压输液系统、进样系统、分离系统和检测系统。辅助装置：脱气机、梯度洗脱装置、自动进样