鉴别免疫与感染动物的布鲁氏菌天然半抗原抗体琼脂扩散试验.docxVIP

ICS11.220CCSB41

团体标准

T/CVMA291—2025

鉴别免疫与感染动物的布鲁氏菌天然半抗原抗体琼脂扩散试验

TheProtocolofdetectingtheantibodiesofBrucellanativehaptenby

argargelimmunodiffusiontest（AGID）fordiscriminatinginfectedanimals

fromvaccinatedanimals

2025-9-30发布2025-9-30实施

中国兽医协会发布

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I

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由中国动物卫生与流行病学中心提出。

本文件由中国兽医协会归口。

本文件起草单位：中国动物卫生与流行病学中心、青岛市动物疫病预防控制中心、新疆生产建设兵团第十二师畜牧水产发展服务中心、青岛立见生物技术有限公司、包头市动物疫病预防控制中心、内蒙古包头市固阳县畜牧技术服务中心。

本文件主要起草人：邵卫星、李彦、焉鑫、段笑笑、赵明、孙荣钊、徐晶晶、孙世雄、张培培、张研博、亓菲、杜建军、王东云、马帅、孙明军、张皓博、刘蒙达、靳继惠、黄孟锟、孙翔翔。

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II

引言

布鲁氏菌病（Brucellosis）是我国当前最重要的人兽共患病之一。由于动物接种布鲁氏菌疫苗可严重干扰布鲁氏菌病的流行病学监测及诊断，因此，需要一种简单、快速、可有效区分疫苗免疫和感染动物的抗体检测方法。光滑型布鲁氏菌的天然半抗原（NativeHapten，NH）是一种分子量小、抗原性较弱的抗原，感染动物与免疫动物诱导的NH抗体不同，主要体现在：野生型布鲁氏菌感染动物后，可持续刺激机体产生针对NH的抗体，持续时间长，且抗体与NH抗原结合常数相对高；而接种动物后，疫苗株可被机体快速清除，不能持续刺激机体产生NH抗体，持续时间短，且抗体与抗原结合常数相对低。依据NH抗体在感染和免疫动物体内抗体的滴度、持续时间及与NH抗原结合常数的不同，可通过检测NH抗体来鉴别免疫动物和感染动物。

本文件仅规定了牛种布鲁氏菌和羊种布鲁氏菌两种光滑型布鲁氏菌感染牛、羊引起的NH抗体琼脂扩散检测方法的技术内容。

本文件等同采用WOAH《陆生动物诊断试验与疫苗手册》中3.1.4章“布鲁氏菌病（牛种、羊种和猪种布鲁氏菌感染）（2022版）”的8.9节内容。

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鉴别免疫与感染动物的布鲁氏菌天然半抗原抗体琼脂扩散试验

1范围

本文件规定了检测牛、羊血清中布鲁氏菌天然半抗原（NH）抗体琼脂扩散试验方法（AGID）的程序。

本文件适用于检测布鲁氏菌疫苗免疫背景清晰、且虎红平板凝集试验结果为阳性的牛、羊。在适当时机检测，其阳性结果可作为已感染牛、羊且在体内处于感染活跃期布鲁氏菌的指征或布鲁氏菌正在经阴道/或乳汁、精液向体外排出的指征。

本文件不适用于接种粗糙型疫苗牛、羊的检测；本文件阴性结果不适用于判定牛、羊没有感染布鲁氏菌。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

感染活跃期activestage

病原菌感染易感动物，且在易感动物体内处于增殖状态的阶段。如布鲁氏菌感染牛、羊等易感动物后且进入感染活跃期，感染动物常出现菌血症，并通过机体向外排菌的情况（其血液、乳汁、阴道分泌物、精液等可分离检测到布鲁氏菌）。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

AGID：琼脂凝胶免疫扩散试验（Agargelimmunodiffusiontest）

NH：天然半抗原（Nativehapten）

5试剂和耗材

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5.1试剂与耗材

5.1.1除特别说明以外，本文件所用试剂均为分析纯，试验用水符合GB/T